[发明专利]用于检测病毒性出血性败血病病毒的遗传突变的方法

权利要求书

1.一种通过使用具有与其附接的报告基团和猝灭基团的PNA探针确定病毒性出血性败血病病毒(VHSV)非病毒体(NV)基因中的突变的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)通过混合(i)含有病毒性出血性败血病病毒(VHSV)或包含病毒性出血性败血病病毒(VHSV)非病毒体(NV)基因的突变位点的靶核酸的样品和(ii)与所述包含病毒性出血性败血病病毒(VHSV)NV基因的突变位点的靶核酸的核苷酸序列互补地结合的PNA探针，使每个PNA探针与样品杂交；

(b)在改变杂交产物的温度的同时，获得所述杂交产物的熔解温度；

(c)将所述杂交产物的每个熔解温度划分为对于每个PNA探针的温度区带，并且将编码分配给所述温度区带；和

(d)在与步骤(a)至(b)相同的条件下，使预期具有突变的样品发生反应，由此获得样品的熔解温度，并且根据步骤(c)的分配的编码对获得的熔解温度进行编码，由此确定病毒性出血性败血病病毒(VHSV)非病毒体(NV)基因中的突变的类型。

2.权利要求1的方法，其中，所述PNA探针具有由SEQ ID NO:1至6中的任一个表示的序列。

3.权利要求1的方法，其中，分配给野生型的靶核酸和所述PNA探针之间的熔解温度的编码不同于分配给所述靶核酸的突变体和所述PNA探针之间的熔解温度的编码。

4.权利要求1的方法，其中，所述报告基团为选自下组的一个或多个：FAM(6-羧基荧光素)、德克萨斯红、HEX(2',4',5',7',-四氯-6-羧基-4,7-二氯荧光素)和Cy5。

5.权利要求1的方法，其中，所述猝灭基团为选自下组的一个或多个：TAMRA(6-羧基四甲基-罗丹明)、BHQ1、BHQ2和Dabcyl。

6.权利要求1的方法，其中，所述PNA探针为由SEQ ID NO:1至3表示的PNA探针组，或由SEQ ID NO:4至6表示的PNA探针组。

7.一种用于证实病毒性出血性败血病病毒(VHSV)非病毒体(NV)基因中的核苷酸序列突变的位置的试剂盒，所述试剂盒包含多种PNA探针，每一种PNA探针具有与其附接的报告基团或猝灭基团，与所述病毒性出血性败血病病毒(VHSV)非病毒体(NV)基因互补地结合，并且具有选自SEQ ID NO:1至6的核苷酸序列。

8.权利要求7的试剂盒，其中，所述PNA探针为由SEQ ID NO:1至3表示的PNA探针组，或由SEQ ID NO:4至6表示的PNA探针组。