[发明专利]用于纯化纤维蛋白原的方法

权利要求书

1.一种用于纯化纤维蛋白原的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)通过将甘氨酸添加到含有纤维蛋白原的溶液中使甘氨酸的浓度为1.5至2.5M而使所述溶液的纤维蛋白原沉淀，然后去除上清液，并回收沉淀物；

(b)使步骤(a)的沉淀物溶解于溶解缓冲液中以获得溶液，通过向其中添加甘氨酸使甘氨酸浓度为0.5至0.9M而使所述溶液沉淀，和回收上清液；

(c)通过向其中添加甘氨酸使甘氨酸浓度为1.5至2.5M而使步骤(b)的上清液沉淀，和回收沉淀物；和

(d)使步骤(c)的沉淀物溶解于溶解缓冲液中以获得溶液，并使用纳米过滤器使所述溶液经受纳米过滤(NF)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(b)和(d)中用于溶解所述沉淀物的所述溶解缓冲液包含pH 6.0至9.0的10至100mM柠檬酸钠。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(d)中的所述纳米过滤在20至37℃在0.5至2.5bar的压力下进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(a)的所述含有纤维蛋白原的溶液通过包括以下步骤的方法获得：

(i)使用溶解缓冲液溶解含有纤维蛋白原的低温糊状物以获得溶液；

(ii)将吸附剂添加到所述溶液，由此通过吸附去除杂质；和

(iii)通过溶剂/去污剂(S/D)处理使包含在所述糊状物中的病毒失活。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(i)中的所述低温糊状物使用所述溶解缓冲液以1:2至1:6的体积比溶解。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(i)中的所述溶解缓冲液为包含20mM柠檬酸钠、100mM NaCl和100mM甘氨酸的缓冲液。

7.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(ii)中使用的所述吸附剂是氢氧化铝(Al(OH)₃)。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，基于所述糊状物的重量，以0.05至0.5wt％的量使用所述氢氧化铝。

9.根据权利要求4所述的方法，其中，步骤(iii)的所述溶剂/去污剂处理使用包含非离子去污剂和磷酸三正丁酯(TNBP)的溶剂/去污剂溶液进行。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述非离子去污剂为选自下组的至少一个：聚山梨醇酯80(Tween 80)、聚山梨醇酯20(Tween 20)、Triton X-100和Triton X-45。

11.根据权利要求1所述的方法，其在步骤(c)和(d)之间进一步包括步骤(c’)：使在步骤(c)中回收的沉淀物溶解于溶解缓冲液中以获得溶液，通过向其中添加甘氨酸使甘氨酸浓度与步骤(a)的甘氨酸浓度相同而使所述溶液沉淀，以获得沉淀物。

12.根据权利要求1所述的方法，其在步骤(d)的纳米过滤后进一步包括选自(e)超滤/渗滤(UF/DF)步骤和(f)配制步骤中的至少一个步骤。