[发明专利]用于制备具有定义的糖基化模式抗体的方法

权利要求书

1.一种方法，该方法包括从编码所述抗体的CHO糖基化突变细胞系中表达抗体，其中所述CHO细胞系被突变，使得由细胞产生的抗体上的N-聚糖具有末端糖，该末端糖是N-乙酰基葡糖胺。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该突变至少在UDP-Gal高尔基体转运蛋白中提供下调。

3.根据权利要求2所述的方法，其中该突变进一步提供至少CMP-唾液酸高尔基体转运蛋白的下调，GlcNAc-TV的下调或错误定位，GlcNAc-TIII的上调及其组合。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在N-聚糖的末端糖是N-乙酰基葡糖胺。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该细胞系是制造细胞系。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中该细胞系选自下组，该组包含：Lec3.2.8、Lec4.8、Lec4A.8、Lec8和Lec10.8。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其进一步包括使从CHO突变细胞系表达的抗体上的N-聚糖中的N-乙酰基葡糖胺底物，在酶催化剂存在下与反应性糖反应的步骤，以添加所述反应性糖残基至聚糖上。

8.根据权利要求7所述的方法，其中该酶是转移酶。

9.根据权利要求8所述的方法，其中该转移酶是GalT酶，包括其突变版本，其中一个或两个氨基酸被替换、缺失或添加。

10.根据权利要求9所述的方法，其中该GalT酶是选自下组的突变形式，该组包含Y289L、Y289N、Y289I和R228K。

11.根据权利要求10所述的方法，其中该GALT酶具有突变Y289L。

12.根据权利要求7所述的方法，其中该反应性糖包含选自酮、炔基、叠氮化物的化学官能团。

13.根据权利要求12所述的方法，其中该反应性糖是半乳糖胺的衍生物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中该反应性糖包含GalAz或酮基-Gal残基。

15.根据权利要求7至14中任一项所述的方法，其中该反应性糖从酶底物UDP-GalX转移，其中UDP代表尿苷二磷酸，Gal代表半乳糖残基，并且X代表醛、炔基或叠氮化物形式的官能团。

16.根据权利要求7至15中任一项所述的方法，其包括将有效载荷轭合至通过酶转移添加到聚糖上的半乳糖残基中的醛、炔基或叠氮化物官能团的另外的步骤。

17.根据权利要求16所述的方法，其中该有效载荷选自下组，该组包含毒素、药物分子(例如细胞毒性剂)、聚合物、抗体或其结合片段。

18.根据权利要求17所述的方法，其中该药物分子选自下组，该组包含美登木素生物碱，例如N 2'-脱乙酰基-N 2'-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)、N 2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM3)或N 2'-脱乙酰基-N 2'(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)。

19.根据权利要求17所述的方法，其中该有效载荷是毒素。

20.根据权利要求17所述的方法，其中该聚合物是天然聚合物，例如淀粉或白蛋白或合成聚合物，例如PEG。