[发明专利]诊断伴随过度细胞死亡的疾病的方法以及用于其实施的试剂盒

权利要求书

1.一种伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

a)人血浆采样；

b)血浆的等温核酸扩增；

c)从根据步骤b)制备的反应混合物中纯化核酸；

d)通过实时聚合酶链式反应方法进行核酸定量，并测定样品中的系数К，如下所示：

К＝C₁或或或

其中

–聚合酶链式反应阈值循环的值；

e)К系数与参考值的比较；

f)К系数值小于参考值，诊断伴随细胞死亡增加的疾病。

2.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，从血浆中没有初步分离核酸的情况下进行血浆的等温核酸扩增。

3.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，血浆的等温核酸扩增在装有血浆的相同的管中进行。

4.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，血浆核酸包括基因组DNA、线粒体DNA、信使RNA、转运RNA、微小RNA、外泌体核酸。

5.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述伴随细胞死亡增加的疾病是肿瘤疾病。

6.如权利要求5所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述肿瘤疾病选自下组：乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、胸腺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑胶质瘤。

7.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述伴随细胞死亡增加的疾病是肝病。

8.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述参考值被确定为通过健康群体筛查获得的К系数的平均值。

9.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述伴随细胞死亡增加的疾病是乳腺癌，并且所述参考值等于2。

10.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述伴随细胞死亡增加的疾病是肝病，并且所述参考值等于2。

11.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述糖酵解酶选自下组：己糖激酶、磷酸葡萄糖异构酶、磷酸果糖激酶、果糖二磷酸醛缩酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸甘油醛脱氢酶、磷酸甘油酸酯激酶、磷酸甘油酸变位酶、烯醇酶和丙酮酸激酶。

12.如权利要求所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述线粒体DNA片段选自线粒体基因组，包括转运RNA基因、12S核糖体基因、16S核糖体基因、NADH-脱氢酶亚基因、细胞色素氧化酶亚基因、ATP合成酶亚基因和细胞色素C还原酶基因。

13.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，使用DNA聚合酶phi29进行血浆的等温核酸扩增。

14.如权利要求13所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，使用结合单直链DNA的蛋白质、海藻糖、随机引物、去垢剂、脱氧核苷三磷酸酯、氯化镁进行血浆的等温核酸扩增。

15.如权利要求14所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，所述随机引物是随机-7硫代。

16.如权利要求1所述的伴随细胞死亡增加的疾病的诊断方法，其特征在于，通过向反应混合物中加入乙二胺四乙酸酯来终止血浆的等温核酸扩增。