[发明专利]样品多重循环和原位成像的方法

权利要求书

1.一种通过多重循环对样品进行原位成像的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(i)提供固定在样品支架上的样品；

(ii)提供微流体装置，其包括微流体室，将在所述微流体室的一端的至少一个流体入口和所述微流体室的另一端的至少一个流体出口配置成在压力下通过微流体室传导从给液系统供应的流体，用于以均匀的方式在所述微流体室内平流输送流体物质和试剂，其中所述微流体室的至少一个壁由样品支架形成，并且其中微流体室的体积为2.5μl至200μl；

(iii)将所述样品支架安装在所述微流体室上，样品面向微流体室的内部；

(iv)依次注入多种试剂，包括至少一个成像探针，通过流体入口进入微流体室，流速范围为1μl/s至100μl/s；

(v)对由与所述至少一个成像探针反应的样品的组分发射的信号成像；

(vi)用不同的成像探针重复步骤(iv)和(v)；

其中所述依次注入多种试剂包括：

-洗脱步骤(S1)，在该步骤中注入洗脱缓冲液以除去可能残留在样品上的不需要的物质；

-非特异性结合阻断步骤(S2)，在该步骤中注入封闭液；

-样品标记步骤(S3)，在该步骤中注入成像探针；和

-任选的预成像步骤(S4)，在该步骤中注入成像缓冲液，

其中这些步骤中的每一步之前和/或之后，包括任选的洗涤步骤，所述洗涤步骤中注入洗涤缓冲液，

其中所述至少一种成像探针是由注入特异性抗体序列作为标记探针和色原或荧光检测分子产生的，靶向在所述样品内待分析的分子实体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述注入的多种试剂的顺序中的每个步骤包括针对每种试剂的两个流速步骤：

-第一流速步骤，在该步骤中以1μl/s至100μl/s的初始流速注入试剂；

-第二流速步骤，在该步骤中，在注入顺序中的下一个试剂之前，以较所述初始流速低的流速注射相同的试剂以确保将所述试剂与样品一起温育。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一流速步骤持续1s至120s。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，试剂的所述第二流速步骤持续1分钟至30分钟。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品标记步骤包括第一步骤(S3')，其中注射第一抗体，洗涤步骤(S3”)，其中注射洗涤缓冲液和另一步骤(S3””)，其中注射第二抗体。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，依次注入多种试剂，步骤包括：

-洗涤步骤(S0)，其中注入洗涤缓冲液；

-非特异性结合阻断步骤(S2)，其中注入封闭液；

-样品标记步骤(S3)，在该步骤中注入成像探针；

-洗涤步骤(S3a)，其中注入洗涤缓冲液；

-任选的预成像步骤(S4)，在该步骤中注入成像缓冲液，其中样品标记步骤包括第一步骤(S3')，其中注射第一抗体，洗涤步骤(S3”)，其中注射洗涤缓冲液和另一步骤(S3””)，其中注射第二抗体。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品标记步骤包括注射至少一种标记的探针，这样可以与样品中的某些DNA/RNA物质进行原位杂交。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述标记的探针为标记的RNA或DNA探针。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述样品标记步骤还包括在所述微流体室内施加温度循环，用于使所述样品内的DNA/RNA物质与所述RNA或DNA探针杂交。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，成像步骤(v)通过荧光显微镜或明视显微镜进行。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括步骤(iv)至(v)的至少2-80个循环。