[发明专利]鹅膏菌素轭合物

说明书

本发明涉及一种轭合物，其包含(a)鹅膏毒素，所述鹅膏毒素包含(i)具有6'‑脱氧位置的氨基酸4；和(ii)具有S‑脱氧位置的氨基酸8；(b)靶结合部分；以及(c)任选地，连接所述鹅膏毒素和所述靶结合部分的连接体。本发明还涉及包含这种轭合物的药物组合物。

技术领域

本发明涉及一种轭合物，其包含(a)鹅膏毒素(amatoxin)，所述鹅膏毒素包含(i)具有6'-脱氧位置的氨基酸4；和(ii)具有S-脱氧位置的氨基酸8；(b)靶结合部分；以及(c)任选地，连接所述鹅膏毒素和所述靶结合部分的连接体。本发明还涉及包含这种轭合物的药物组合物。

背景技术

鹅膏毒素是由8个氨基酸组成的环肽，发现于鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蕈类中(见图1)。鹅膏毒素特异性抑制哺乳动物细胞的DNA-依赖性RNA聚合酶II，并且由此还抑制受影响细胞的转录和蛋白生物合成。细胞内转录的抑制导致生长和增殖的停止。尽管不是共价连接，但是鹅膏菌素(amanitin)与RNA聚合酶II之间的络合是非常紧密的(K_D＝3nM)。将鹅膏菌素从酶上解离是一个非常缓慢的过程，因而使得受影响的细胞不可能恢复。当转录抑制持续太久时，细胞将经历程序性细胞死亡(细胞凋亡)。

已经在1981年通过使用与色氨酸(Trp)(氨基酸4，见图1)吲哚环连接的连接体经由重氮化将抗Thy1.2抗体与α-鹅膏菌素偶联而开发了鹅膏毒素作为细胞毒性部分用于肿瘤治疗的用途(DavisPreston,Science 213(1981)1385-1388)。DavisPreston确定了连接的位置为7’位。MorrisVenton同样证明了7’位取代产生了衍生物，其保持了细胞毒活性(MorrisVenton,Int.J.Peptide Protein Res.21(1983)419-430)。

专利申请EP 1 859 811 A1(2007年11月28日公开)描述了轭合物，其中β-鹅膏菌素的鹅膏毒素氨基酸1的γC-原子直接(即无连接体结构)与白蛋白或者单克隆抗体HEA125、OKT3或PA-1偶联。此外，这些轭合物显示了对乳腺癌细胞(MCF-7)、伯基特淋巴瘤细胞(Raji)和T淋巴瘤细胞(Jurkat)的增殖具有抑制作用。虽然建议使用连接体，包括包含例如酰胺、酯、醚、硫醚、二硫化物、脲、硫脲、烃部分等元件的连接体，但是实际上并没有给出这样的结构，且没有提供更多的细节，例如在鹅膏毒素上的连接位点。

专利申请WO 2010/115629和WO 2010/115630(都于2010年10月14日公开)描述了轭合物，其中抗体，例如抗EpCAM抗体，如人源化抗体huHEA125，通过(i)鹅膏毒素氨基酸1的γC-原子、(ii)鹅膏毒素氨基酸4的6’C-原子或(iii)鹅膏毒素氨基酸3的δC-原子与鹅膏毒素偶联，每种情况下直接偶联或通过抗体与鹅膏毒素之间的连接体偶联。所建议的连接体包含例如酰胺、酯、醚、硫醚、二硫化物、脲、硫脲、烃部分等的元件。另外，这些轭合物显示了对乳腺癌细胞(MCF-7细胞系)、胰腺癌(Capan-1细胞系)、结肠癌(Colo205细胞系)和胆管癌(OZ细胞系)的增殖具有抑制作用。

专利申请WO 2012/119787描述，靶结合部分可以通过连接体在色氨酸氨基酸4上的另外的连接位点即1'-N位置与鹅膏毒素连接，而不干扰这些鹅膏毒素与其靶标——哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II的相互作用。

已知鹅膏毒素在与大生物分子载体如抗体分子偶联时是相对无毒的，并且只有在生物分子载体被切掉之后它们才显现出它们的细胞毒活性。考虑到鹅膏毒素的毒性，尤其是对肝细胞的毒性，最重要的是用于靶向肿瘤治疗的鹅膏毒素轭合物施用之后在血浆中保持高度稳定，并且鹅膏毒素的释放发生在在靶细胞中内化之后。在这一背景下，轭合物稳定性的微小改进可能对用于治疗途经的鹅膏毒素轭合物的治疗窗和安全性产生显著的影响。

专利申请WO 2012/041504描述了鹅膏毒素与结合分子的轭合物，其使用脲部分作为与结合分子的连接体。可以证明这种连接比酯键明显更稳定。