[发明专利]靶分析物的亚细胞定位

权利要求书

1.一种定量和确定包括来自全血的细胞的样品中的至少一个分析物的分布的方法，所述方法包括：

用第一透化试剂处理所述细胞的第一等分试样，所述第一透化试剂包括0.015％和0.125％之间的洋地黄皂苷以使细胞质膜透化但不使核膜透化；

用第二透化试剂处理所述细胞的第二等分试样，所述第二透化试剂包括0.25％的洋地黄皂苷和0.125％的Triton X-100中的至少一种以使所述细胞质膜和所述核膜透化；

洗涤所述第一等分试样和所述第二等分试样；

用能够特异性结合到所述分析物的标记试剂染色所述第一等分试样和所述第二等分试样；

使用流式细胞仪来测量来自所述第一等分试样的多个细胞中的所述标记试剂的第一信号和来自所述第二等分试样的多个细胞中的所述标记试剂的第二信号；以及

比较所述第一信号与所述第二信号以定量和确定所述分析物的分布；

其中所述分析物位于所述全血中所包括的未纯化的稀有细胞群中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述测量步骤包括逐个细胞地测量来自所述第一等分试样的所述多个细胞的所述第一信号和来自所述第二等分试样的所述多个细胞的所述第二信号。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括用第三透化试剂处理所述细胞的第三等分试样，所述第三透化试剂使所述细胞质膜和细胞器膜透化。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一透化试剂包括pH为4.5-6.5的1-100mM的MES，0-274mM的NaCl以及0-5.2mM的KCl。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一透化试剂包括137mM的NaCl以及2.7mM的KCl。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二透化试剂包括pH为4.5-6.5的1-100mM的MES，0-274mM的NaCl以及0-5.2mM的KCl。

7.根据权利要求1所述的方法，其中处理所述细胞的所述第一等分试样的所述步骤包括用固定剂固定所述细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述固定剂包括1％-10％的多聚甲醛。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞包括单核细胞。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物是蛋白质、染色体、脂质、离子、寡核苷酸、多核苷酸、肽或糖。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述蛋白质是可活化蛋白质。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述蛋白质是组成性地存在于一个区室或另一个区室中的蛋白质。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述蛋白质是在患病或异常样品中差异表达或活化的蛋白质。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白质是转录因子。

15.根据权利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白质是激酶。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白质是磷酸酶。

17.根据权利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白质是DNA或RNA结合或修饰蛋白。

18.根据权利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白质是核输入或输出受体。

19.根据权利要求11所述的方法，其中所述可活化蛋白质是细胞凋亡或细胞存活的调节因子。