[发明专利]治疗性膜囊泡

权利要求书

1.一种产生膜囊泡的方法，其包含：

a.提供细胞外囊泡或细胞器；

b.通过用pH在9至14范围内的水性溶液处理来打开所述细胞外囊泡或所述细胞器以获得膜；

c.去除囊泡内或细胞器内含物；和

d.重新组装所述膜以形成膜囊泡。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤d是通过超声处理、机械振动、通过多孔膜挤出、电流和其组合中的一种或多种来完成。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包含：

e.将负荷加载到所述膜囊泡中，其中步骤e可以伴随步骤d或在步骤d之后来进行。

4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤e是在步骤d之后通过物理操作来完成，其中所述物理操作选自电穿孔、超声处理、机械振动、通过多孔膜挤出、施加电流和其组合。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其中所述负荷选自合成生物活性化合物、天然生物活性化合物、抗菌化合物、抗病毒化合物、蛋白质、核苷酸、基因组编辑系统、微小RNA、siRNA、长链非编码RNA、反义寡核苷酸、吗啉基、mRNA、t-RNA、y-RNA、RNA模拟物、DNA和其组合。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述负荷是TGF-β。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述基因组编辑系统是CRISPR系统。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述CRISPR系统是CRISPR-Cas9系统。

9.根据权利要求5所述的方法，其中所述微小RNA或所述siRNA特异性地结合到编码突变型或非突变型致癌基因的转录物中。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述致癌基因是KRAS G12D、KRAS G12C、KRASG12V、N-Myc、c-Myc或L-Myc。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述膜囊泡具有至少一种不同于衍生所述膜囊泡的细胞外囊泡或细胞器群的生理特性，其中所述生理特性与以下各项中的一种或多种相关：生物分布、细胞摄取、半衰期、药效动力学、效力、剂量、免疫应答、加载效率、稳定性或对其它化合物的反应性。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述不同的生理特性是改善的靶向效率，改善的递送，或对受体细胞、器官或受试者的治疗性负荷的增加。

13.根据权利要求3至12中任一项所述的方法，其中相比于将所述负荷加载到衍生所述膜囊泡的细胞外囊泡或细胞器中，所述负荷更有效地加载到所述膜囊泡中。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞外囊泡是衍生自细胞外囊泡体的细胞外囊泡亚群，或其中所述细胞器是衍生自多个细胞器的一种细胞器亚型。

15.根据权利要求14所述的方法，其在步骤a之前进一步包含：

使表位特异性结合物与所述细胞外囊泡体或所述细胞器接触；并且从所述细胞外囊泡体或多个细胞器中分离所述细胞外囊泡亚群或亚细胞器亚型。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述表位特异性结合物是抗体、噬菌体或适体。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述表位特异性结合物是针对至少一种线粒体膜蛋白、优选地MTCO2蛋白的抗体。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述表位特异性结合物是针对表面标记物CD63的抗体。