[发明专利]新型多糖-蛋白质结合物及其获取工艺

权利要求书

1.具有高免疫原性的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述多糖-蛋白质结合物包括：

-至少一种从革兰氏阴性菌群得到的多糖，所述革兰氏阴性菌群包括但不限于b型流感嗜血杆菌(Hib)、脑膜炎奈瑟菌(Men)和肺炎链球菌；以及

-至少一种载体蛋白，其中：

-所述多糖-蛋白质结合物具有稳定的氨基甲酸酯键-O-(C＝O)-N-，

-所述结合物的分子式为PS-L1-L2-CR，其中，PS为多糖，L1为氨基甲酸酯键，L2为酰肼键，CR为载体蛋白。

2.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述多糖优选脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖，更优选A、C、Y、W或X血清群的脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖。

3.根据权利要求2所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述多糖为X血清群的脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖。

4.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述载体蛋白选自但不限于TT(破伤风类毒素)、DT(白喉类毒素)、CRM197(DT无毒突变体)和OMPV(外膜蛋白囊泡)。

5.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述结合物稳定，并且能够单独或组合作为候选疫苗使用。

6.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述结合物在室温下是稳定的。

7.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述结合物在37℃下储存28天之后，其游离多糖增加量少于10.5％。

8.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，与阴性对照组相比，在三次剂量之后，所述结合物的所述高免疫原性滴定度增加值在100倍至150倍之间。

9.根据权利要求1所述的新型多糖-蛋白质结合物，其中，所述结合物显示出，与赋形剂对照组相比，两次剂量之后的血清杀菌试验滴定度在32倍至128倍之间，并且三次剂量之后的血清杀菌试验滴定度在118倍至198倍之间。

10.一种获取具有高免疫原性的新型多糖-蛋白质结合物的工艺，所述工艺包括下列步骤：

(a)将所述至少一种荚膜多糖降解到最适宜的尺寸范围，

(b)将步骤(a)中所述降解后的多糖溶解在强电解质盐中，并对所得混合物进行预定时间段的恰当混合，其中，所述预定时间段为30分钟至90分钟，

(c)利用已知技术除去步骤(b)中所得混合物的水分，从而获得干燥的多糖，所述已知技术包括但不限于冻干法、旋转蒸发法或真空干燥法，

(d)将步骤(c)所述干燥的多糖溶解在至少一种非水性非质子溶剂中，

(e)将步骤(d)所得溶液与预定浓度的至少一种无水活化剂进行反应，

(f)将步骤(e)所得混合物保持预定时间段，以便获得具有至少一个连接子的活性多糖，其中，所述预定时间段为2小时至3小时，

(g)利用已知方法净化步骤(f)中的所述活性多糖，所述已知方法包括但不限于硫酸铵沉淀法、渗滤法、尺寸排除色谱法和/或其组合，以及

(h)将步骤(g)中的所述净化后的活性多糖与具有至少一个嵌入连接子的至少一种活性载体蛋白在较宽的pH范围内进行预定时间段的反应，其中，所述预定时间段为2小时至20小时。

11.根据权利要求10所述的获取新型多糖-蛋白质结合物的工艺，其中，所述降解后的多糖的所述最适宜尺寸范围的分配系数为0.38+0.06kD。

12.根据权利要求10所述的获取新型多糖-蛋白质结合物的工艺，其中，所述非水性非质子溶剂选自，但不限于无水二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)或二甲基乙酰胺。