[发明专利]具有抗致病性质的植物级分

说明书

本发明包括使用改进的组合物和包括热稳定植物汁液可溶性植物蛋白的改进的组合物用于抗致病作用的方法；该改进包括：该包括热稳定植物汁液可溶性植物蛋白的组合物本质上是不含较易溶于植物汁液的组分的水不溶性浓缩物质，且富含植物汁液的热稳定蛋白质；由该组合物制备的剂型用于脂联素激动剂作用，用于降低选自II型糖尿病、高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、心脏病和肥胖症中的一种或多种病症的风险，并且该剂型用于抗微生物作用，用于在有或没有与其他抗微生物剂的协同作用下降低植物和动物中微生物感染的风险或者治疗该微生物感染。本发明包括一种组合物，其基本上由本发明中提供的红外吸收光谱进行表征。

技术领域

本发明涉及渗调蛋白(Osmotin)样蛋白、含有它们的组合物和由植物制备该组合物的方法。本发明还涉及含有渗调蛋白或渗调蛋白样蛋白的不纯或半纯化组合物的渗调蛋白样蛋白与由植物制备的以级分(fractions)形式的衍生自绿叶的其它成分一起用于治疗人类由缺乏脂联素引起的疾病和病症的用途。这样的疾病和病症包括II型糖尿病、胰岛素抵抗、高脂血症、动脉硬化和心脏病。

背景技术

Singh等人(1987)(NARENDRA K.SINGH,CHARLES A.BRACKER，PAUL M.HASEGAWA,AVTAR K.HANDA,SCORR BUCKEL,MARK A.HERMODSON,ED PFANKOCH,FRED E.REGNIER和RAYA.BRESSAN*Plant Physiol.(1987)85,529-536)报道了发生盐适应烟草细胞的基因表达的特异性改变，因为若干新型蛋白质由适应细胞产生，包括主要的26kD蛋白质。这种蛋白质被Singh等人命名为“渗调蛋白”，因为它由对盐或干燥应力进行逐级渗透调节的细胞合成和积累，而不是由渗透休克诱导的。Singh等人进一步补充了，渗调蛋白是阳离子蛋白质，pI2值>8.2。Singh等人还观察到，在无应力的未适应细胞中，还合成了具有较低pI的免疫学相关的26kD蛋白质，但其在正常生长条件下不积累。据报道，渗调蛋白积累取决于细胞对NaCl或水应力的调节。Singh等人描述的分离方法包括冷丙酮洗涤的烟草细胞的均质化，使该烟草细胞适应25g/L NaCl，(a)在不含洗涤剂的缓冲液中提取它们并在离心后收集上清液作为级分I，并且(b)用含有洗涤剂的提取缓冲液提取细胞小粒，并收集上清液作为级分II。Singh等人(1987)还通过硫酸铵沉淀来分离渗调蛋白。在放弃40％沉淀物后，通过在4℃下以10,000g离心来收集为80％硫酸铵沉淀物的级分I。将其再悬浮在提取缓冲液I中，并在44℃下换五次4L蒸馏水进行渗析20小时。用80％硫酸铵沉淀级分II上清液，并收集10,000g浮垫(由于存在洗涤剂)。将该垫悬浮在提取缓冲液I中，并如对级分I所做的那样单独渗析。渗析后，将级分I以10,000g单独离心10分钟，并收集澄清的上清液。通过加入2倍级分II的等体积的再悬浮缓冲液(40mM磷酸钾缓冲液[pH6.0]、8M脲和0.2％NP-40)溶解含有混浊沉淀物的级分II。

在A-25和SCX-聚酰胺HPLC上进一步纯化级分I和级分II，分别得到渗调蛋白I和渗调蛋白II，将它们用水渗析并悬浮在缓冲液中，得到由SDS-PAGE显示的单个26kD蛋白质。

代表用作分子筛的多孔葡聚糖凝胶，其中在加载到的凝胶上之后，具有最大分子大小的分子种类首先被洗脱，并且具有最小分子大小的分子种类最后洗脱并且其余的分子种类按其分子大小顺序洗脱，较大分子种类比较小分子种类更早洗脱。

已经发现渗调蛋白II对大多数蛋白水解酶具有抗性。渗调蛋白I更易受影响，然而，发现其N端部分对蛋白水解酶具有抗性。渗调蛋白II本质上是疏水性和颗粒状的。

Singh等人(1987)指出了没有对于渗调蛋白的功能测试，因此鉴定仅基于SDS_PAGE电泳中在约26kD位置处的渗调蛋白的均匀带。