[发明专利]细胞裂解和核酸扩增的方法

权利要求书

1.一种核酸扩增方法，所述方法包括：

通过使样本与配方不包含磷酸盐缓冲剂组分的营养培养基接触来形成富集培养物，其中所述营养培养基包含第一缓冲剂；

在促进靶微生物生长的温度下保持所述富集培养物一段时间；

在保持所述富集培养物之后，通过将第一体积的所述富集培养物与第二体积的裂解缓冲剂混合以形成第三体积的含水组合物来形成含水组合物，

其中将所述第一体积的所述富集培养物与所述第二体积的所述裂解缓冲剂混合包括将未稀释的第一体积的所述富集培养物与所述第二体积的所述裂解缓冲剂混合；

其中所述裂解缓冲剂包含第二缓冲剂；

其中所述裂解缓冲剂包含有机多价阳离子螯合试剂，其中所述有机多价阳离子螯合试剂具有相对于三价铁的大于或等于10^4.2的第一亲和常数以及相对于镁的小于10^3.8的第二亲和常数，其中所述第一亲和常数和所述第二亲和常数是在pH 8.45下的20℃去离子水中测定的；

其中所述裂解缓冲剂在25℃下具有大于8.6的pH；

其中所述含水组合物在25℃下具有8.45至8.85的pH；

其中所述含水组合物中的第一缓冲剂和第二缓冲剂的组合浓度为至少15mM；

其中所述第一体积与所述第二体积的比率大于或等于3:1，并且所述第二体积与所述第三体积的比率小于或等于1:4；

使所述含水组合物与有效量的水不溶性材料接触，所述水不溶性材料多价螯合干扰聚合酶介导的核酸扩增反应的物质；

使所述含水组合物经受热裂解过程；以及

在使所述含水组合物经受热裂解过程之后，使所述含水组合物的一部分经受核酸扩增过程。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述裂解缓冲剂还包含三价铁。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述裂解缓冲剂还包含选自由以下项构成的组的试剂：纳米粒子分散稳定剂、具有11至16的亲水-亲脂平衡的非离子表面活性剂、聚乙烯吡咯烷酮、七水合硫酸镁、含氟表面活性剂、指示剂染料以及上述试剂中的任何两种或更多种的组合。

4.根据权利要求1所述的方法，其中将所述富集培养物保持一段时间包括将所述富集培养物保持4小时至24小时的时间段。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一体积与所述第二体积的比率大于或等于5:1，并且所述第二体积与所述第三体积的比率小于或等于1:6。

6.根据权利要求1所述的方法，其中通过将所述第一体积的所述富集培养物与所述第二体积的所述裂解缓冲剂混合来形成所述含水组合物包括与所述水不溶性材料形成所述含水组合物，所述水不溶性材料将设置在其中的干扰聚合酶介导的核酸扩增反应的物质从所述含水组合物中提取出来。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述水不溶性材料包含多个氧化锆粒子。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述多个氧化锆粒子在所述第三体积中具有10m²/L至600m²/L的表面积。

9.根据权利要求1所述的方法，其中使所述含水组合物的一部分经受核酸扩增过程包括使所述含水组合物的所述部分经受环介导的等温扩增过程。

10.根据权利要求1所述的方法，其中使所述含水组合物的一部分经受核酸扩增过程包括使所述含水组合物的所述部分经受热循环聚合酶链反应过程。

11.根据权利要求1所述的方法，其中形成所述含水组合物基本上由将所述第一体积的所述富集培养物与所述第二体积的所述裂解缓冲剂混合组成。

12.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括：

在使所述含水组合物经受热裂解过程之后，并且在使所述含水组合物的所述部分经受核酸扩增过程之前，使用所述含水组合物的所述部分再水合用于核酸扩增的脱水了的试剂。