[发明专利]用于扩展和分化生产抗体的B细胞的方法

权利要求书

1.一种用于体外扩展B细胞的方法，所述方法包括：

(a)分离至少一种B细胞，和

(b)结合IL-21且没有另外的外源IL-4，用饲养细胞系培养来自步骤(a)的所述至少一种B细胞，所述饲养细胞系包括经修饰表达CD154多肽(或CD40激动剂)和BLyS多肽(或B细胞生存因子)的基质细胞系，其中所述B细胞用所述饲养细胞系在充足的条件下培养并培养充足的时间，以使得所述人B细胞在数量上扩展。

2.权利要求1所述的方法，其中所述B细胞是人B细胞。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述IL-21是外源性添加至所述培养的。

4.权利要求1或2所述的方法，其中所述饲养细胞被修饰为表达IL-21多肽。

5.权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述B细胞的数量被扩展至少平均10⁴倍。

6.权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤(b)中所述用饲养细胞系培养所述至少一种B细胞在少于2周内进行。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中一种B细胞被分离。

8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述至少一种B细胞在步骤(a)中的分离之前已经暴露于抗原。

9.权利要求1-8中任一项所述的方法，其中步骤(b)中所述用饲养细胞系培养所述至少一种B细胞在存在抗原的情况下进行。

10.权利要求1-9中任一项所述的方法，其中步骤(b)的所述培养在没有添加的抗原的情况下进行。

11.权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述至少一种B细胞通过与抗原结合而分离。

12.权利要求1-11中任一项所述的方法，其中在步骤(b)之后，至少10％的所述扩展的B细胞表达IgG。

13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中在步骤(b)之后，至少2.5％的所述扩展B的细胞表达IgA。

14.权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞是权利要求28-35中任一项所述的饲养细胞。

15.一种用于生产单克隆抗体的方法，其包括：

(a)分离B细胞；

(b)将来自步骤(a)的B细胞分成单个B细胞；

(c)结合IL-21且没有另外的外源IL-4，用饲养细胞系培养所述单个B细胞，以生产多个B细胞克隆，所述饲养细胞系包括修饰为表达CD154多肽(或CD40激动剂)和BLyS多肽(或B细胞生存因子)的基质细胞系，

其中所述单个B细胞用饲养细胞系在充足的条件下培养并且培养充足的时间，以使得所述单个B细胞在数量上扩展，并且分化成生产单克隆抗体的B细胞克隆。

16.权利要求15所述的方法，进一步包括(d)评估所述多个B细胞克隆生产的至少一种单克隆抗体的抗原特异性。

17.权利要求15-16中任一项所述的方法，进一步包括(e)纯化所述多个B细胞克隆产生的至少一种单克隆抗体。

18.权利要求15-17中任一项所述的方法，其中所述B细胞在步骤(a)的分离之前已经暴露于抗原。

19.权利要求15-18中任一项所述的方法，其中所述B细胞是人B细胞。