[发明专利]用于扩展和分化生产抗体的B细胞的方法

说明书

提供了可用于体外扩展和分化B细胞的饲养细胞系；用于体外扩展B细胞的方法，其包括用所述饲养细胞系培养B细胞；以及用于体外生产单克隆抗体的方法，其包括在充足的条件和充足的时间内用饲养细胞系培养单个B细胞以诱导B细胞扩展和分化成分泌抗体的B细胞克隆。

相关专利申请的交叉引用

本申请权利要求2016年2月16日提交的美国临时专利申请号62/295,728的优先权的权益，其内容通过引用以其整体并入本文。

序列表

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技术领域

本发明涉及用于生产和支持B细胞，包括人B细胞的方法，所述B细胞可用于生产抗原特异性抗体，更具体为单克隆抗体。更具体而言，本发明涉及培养B细胞以生产单克隆抗体，而不使用杂交瘤技术或EBV-转化的B细胞。

背景技术

已经发现单克隆抗体尤其可用于医学，比如通过开发基于抗体的生物制品或药物制剂。目前用于单克隆抗体生产的方法涉及小鼠杂交瘤方法；即，将生产抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合。其他方法包括EBV-转化的B细胞系和噬菌体展示。使用的生产人单克隆抗体的每种不同的方法都具有技术局限性，使得其难以使用。例如，利用杂交瘤技术，需要“人源化”抗体，以便降低促进针对单克隆抗体的非人部分的免疫应答的频率。另外，对于特定抗原或表位的免疫应答可能是物种特异性的。其他方法具有限制它们广泛用于开发用于治疗和诊断人的单克隆抗体的缺点。

发明内容

本发明基于在可进行B细胞的单个细胞克隆的培养中扩展和分化B细胞的高效方法的发现。在一个方面中，该发现涉及在可进行人B细胞的单个细胞克隆和抗体生产的培养中扩展和分化人B细胞的高效方法。

本发明也基于在培养中扩展和分化B细胞的高效方法的发现，所述方法使得B细胞的单细胞克隆(接种单个B细胞，并将该B细胞扩展成B细胞的克隆)的量和时间段是充足的，从而产生的单克隆抗体的量有利于所产生单克隆抗体的表征。在该方法的一个方面中，人B细胞作为单个克隆扩展和分化，以生产人单克隆抗体。在这些方法的另一方面中，该方法不需要和/或没有添加抗原至扩展培养。在另一方面中，B细胞的抗原特异性是未知的。在另一方面中，B细胞在体外不暴露于抗原。

在本发明的另一方面中，提供了用于生产单克隆抗体，尤其IgG型抗体的体外方法。

在本发明的另一方面中，提供了包括修饰的间质基质细胞或修饰的胸腺上皮细胞的饲养细胞系，其可有效促进和支持培养中的大量B细胞，从而允许比在之前的用修饰小鼠3T3细胞培养B细胞的尝试中观察到的更高水平的单克隆抗体生产。与该方面相关，包括间质基质细胞或胸腺上皮细胞的饲养细胞系，经修饰表达包括CD154(也称为CD40L或CD40配体)和BLyS(B淋巴细胞刺激因子，也称为BAFF(B-细胞活化因子))的组合，或包括CD154、BLyS和IL-21的组合。本发明的饲养细胞支持哺乳动物物种的B细胞，包括人B细胞和鼠B细胞的大量增殖和分化，当B细胞在存在修饰的饲养细胞的情况下体外培养时，不需要添加外源抗原或外源IL-4(即，在缺少外源抗原或外源IL-4的情况下)。