[发明专利]新细菌

说明书

本发明涉及不受普通噬菌体攻击的新型乳杆菌属菌株和具有提高的细胞计数稳定性的新颖乳杆菌属菌株，其在制造基于发酵乳的产品中的用途，以及含有所述菌株的新颖基于乳的产品。

技术领域

本发明涉及不受普通噬菌体攻击的新颖乳杆菌属(Lactobacillus)菌株，其在制造基于发酵乳的产品中的用途，以及含有所述菌株的新颖基于乳的产品。在相关方面，本发明涉及改善乳酸杆菌例如副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)的细胞计数稳定性的方法。

背景技术

发酵乳产品，例如发酵乳饮品、乳酸菌饮料、酸奶、培养乳和奶酪等，经常通常通过提供乳基质，特别是基于动物乳，例如牛乳、山羊乳、羊乳等的乳基质作为培养基，并用乳酸菌使培养基发酵来产生。在生产发酵乳产品的过程中，噬菌体可能攻击细菌，导致乳酸菌活细胞数减少。

特别是作为具有生理效果例如肠功能控制效果和免疫增强效果的保健食品而消费的发酵乳产品依赖于大量活细菌。包含副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)或干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的益生菌的发酵乳产品的生产，经常在乳品厂中受到噬菌体攻击的挑战，导致产品的活细菌含量降低。例如，副干酪乳杆菌LC-01(CHCC2115)菌株在不同的乳品厂中被噬菌体反复攻击。然而，难以用相同物种的另一菌株替换易受噬菌体攻击的菌株，因为替代菌株很少具有类似的功能，例如酸化活性、风味特征和/或相同的益生菌特征。

已经建议获得噬菌体抗性菌株，并且教导了获得抗噬菌体干酪乳杆菌菌株的方法：

JP1341782C3公开了通过从菌株YIT-9018(FERM-P No.4751)中除去原噬菌体而获得的干酪乳杆菌YIT-9029(FERM-P No.5852)菌株。

日本专利19861005712B4公开了通过诱变处理从具有原噬菌体FSW的干酪乳杆菌(例如干酪乳杆菌YIT-9018)中分离温度敏感性突变体，并通过热诱导方法从菌株中除去原噬菌体FSW来获得抗溶菌作用的细菌菌株。

但是，这些方法似乎只对含有原噬菌体的菌株有效。

同时，最近对活细菌的健康相关有益效果以及延长的保质期的关注导致对具有延长的活力例如改善的细胞计数稳定性的乳酸菌的更高要求。

发明内容

因此，本发明的目的是提供获得副干酪乳杆菌或干酪乳杆菌菌株的噬菌体抗性突变体，以及副干酪乳杆菌或干酪乳杆菌菌株的细胞计数稳定性增强的突变体的方法。

本发明人已经发现，与噬菌体挑战和筛选组合的诱变产生了可以代替发酵乳饮料中的母株的噬菌体抗性菌株。

令人惊讶的是，本发明人发现突变菌株与母株相比具有改善的性质，因为与用母株生产的发酵乳相比，发现用本发明菌株发酵的乳具有明显更低的沉淀程度。这减少了向发酵乳制品中添加稳定剂和/或增稠剂的需要。

此外，在密切相关的方面，本发明人开发了改善乳杆菌细胞计数稳定性的方法，并且发现了表现出改善的细胞计数稳定性的新菌株。

更具体而言，本发明人发现，通过修改编码糖基转移酶(通过截短)和涉及O-抗原和磷壁酸(RfbX)输出的膜蛋白的基因，可以获得细胞计数稳定性改善的突变体。

更具体而言，细胞计数稳定性改善的突变体具有一个核苷酸C缺失(CHCC2115参考基因的位置202)，导致截短的糖基转移酶基因，并且在与干酪乳杆菌BL23的eps7M具有同源性的基因中具有突变，也见于CHCC19844。eps7M的基因产物是细胞壁多糖基因簇的一部分。基因比较还显示了与“涉及O-抗原和磷壁酸(RfbX)输出的膜蛋白”的同源性。

eps7M同源物位于糖基转移酶下游三个基因处。