[发明专利]增强白细胞介素10的抗炎作用的方法和组合物

说明书

本发明涉及用于通过除了表达白细胞介素10(IL‑10)肽之外，还表达IL‑10受体1型(IL‑10R1)肽以克服白细胞介素10(IL‑10)的剂量依赖性下调的方法和组合物。该方法可用于治疗多种疾病和症状，包括但不限于神经性疼痛或慢性疼痛；与多发性硬化、脊髓损伤、ALS、神经炎症、关节炎和其他关节疾病相关的症状和生理伤害；和自身免疫性疾病。

相关申请的交叉引用

本国际PCT申请要求2016年4月22日提交的美国临时专利申请第62/326,082号的优先权。

发明领域

本发明涉及通过除了表达白细胞介素10(IL-10)肽之外，还表达IL-10受体1型(IL-10R1)肽来减弱炎症信号传导的失活的方法和组合物。方法用于治疗多种状况，包括但不限于神经性疼痛；与多发性硬化、脊髓损伤、ALS、神经炎症、关节炎和其他关节疾病相关的症状，以及自身免疫性疾病。

发明背景

在下面的讨论中，将出于背景和介绍目的描述某些文章和方法。本文中包含的任何内容都不应被解释为对现有技术的“承认”。申请人明确保留在适当情况下根据适用法律规定来证明本文所引用的文章和方法不构成现有技术的权利。

炎症与增强疼痛的促炎细胞因子和自由基(诸如H₂O₂和NO)的释放有关。为了限制炎症和伤害，还释放抗炎细胞因子诸如白细胞介素-10；例如，在发炎的组织中，IL-10升高至足以限制(cap)过度炎症的浓度。先前研究表明，当在神经性疼痛(参见Watkins,USSN14/066,581)和多发性硬化(MS)(参见Watkins,等人,USSN 14/370,724)的啮齿动物模型中通过鞘内注射以及在具有天然存在(狗)或手术诱导(马)的骨关节炎(OA)的大型动物中通过关节内注射(参见Chavez,等人,USSN 14/905,915)时，人类白细胞介素-10(hIL-10)的质粒定向表达是抗触诱发痛的(anti-allodynic)。在过去几年中进行的IND许可(IND-enabling)研究已经提供令人信服的证据，即，治疗慢性疼痛的该方法可能对人类安全有效。然而，在这些研究的过程中，已经变得清楚的是，IL-10当以低于1ng/ml的浓度存在时表现出最大信号传导效率，并且IL-10浓度的增加反而导致IL-10的下调。本领域对能够克服IL-10信号传导的下调以实现非剂量依赖性的更强大的IL-10介导的炎症抑制的方法和组合物存在需求。本发明解决此需求。

发明概述

本发明涉及用于通过在抗原呈递细胞中除了表达白细胞介素10(IL-10)肽之外，还表达IL-10受体1型(IL-10R1)肽(本文中为“IL-10/IL-10R1表达载体”)来克服IL-10的剂量依赖性下调的方法和组合物。方法用于治疗慢性疼痛或神经性疼痛；与多发性硬化、脊髓损伤、神经炎症、ALS和关节炎和其他关节疾病相关的症状和生理伤害；以及自身免疫性疾病。

因此，在一个实施方案中，本发明提供用于治疗受试者炎症的方法，包括在受试者中的抗原呈递细胞中从一种或更多种细菌、病毒、噬菌体、粘粒或人工染色体载体表达白细胞介素-10(IL-10)肽和白细胞介素10受体1型(IL-10R1)肽。在该实施方案的一些方面中，在抗原呈递细胞中表达的IL-10肽包含在IL-10肽的铰链区中的突变，并且在一些方面中，IL-10肽包含突变，其中IL-10野生型序列的位置129处的苯丙氨酸已被丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸或半胱氨酸取代。在一些优选的方面中，野生型序列的位置129处的苯丙氨酸已被丝氨酸取代。

在一些实施方案中，IL-10肽和IL-10R1肽从单一载体表达，并且在一些方面中，载体是病毒载体，病毒载体是腺相关病毒载体，或病毒载体是慢病毒载体。在一些方面中，IL-10和IL-10R1编码序列被转录为单一mRNA，并且载体包含在IL-10和IL-10R1编码序列之间的内部核糖体进入位点的编码序列或在IL-10和IL-10R1编码序列之间的自裂解2a肽的编码序列。