[发明专利]肽-HLA复合物及产生其的方法

权利要求书

1.一种产生与预选肽复合的HLAI类分子的方法，包括：

(a)提供与现有肽复合的哺乳动物衍生的HLAI类分子；

(b)用所述预选肽体外孵育与所述现有肽复合的HLAI类分子，

其中所述预选肽的浓度足以取代所述现有肽，以产生与所述预选肽复合的HLA I类分子；并且

所述HLA I类分子包含α1、α2、α3和β2m结构域。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述HLA I类分子是可溶的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中与现有肽复合的所述HLA I类分子由用可溶性HLA I类分子转染的哺乳动物细胞产生，其中所述β2m结构域可以是内源的或外源的，优选外源的并且在第二载体上编码。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述可溶性HLA I类分子包含指导HLA I类分子在所述哺乳动物细胞外分泌的信号肽。

5.根据权利要求4所述的方法，其中在所述哺乳动物细胞的培养物的上清液中提供与所述现有肽复合的所述可溶性HLA I类分子。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述HLA I类分子是HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F或HLA-G。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述HLA I类分子是HLA-A并包含SEQ ID NO.2、4、6、8、10或12中任一个的α1、α2和α3结构域。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述HLAI类分子是HLA-B并且包含SEQ ID NO.14、16、18、20或22中任一个的α1、α2和α3结构域。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述HLAI类分子是HLA-C并且包含SEQ ID NO.24、26、28或30中任一个的α1、α2和α3结构域。

10.根据权利要求6所述的方法，其中所述HLAI类分子的所述α3结构域是小鼠K^bα3结构域。

11.根据权利要求6所述的方法，其中在所述HLA I类分子的α2结构域中，第115位的Gln已被Glu取代。

12.根据权利要求6所述的方法，其中所述HLA I类分子包含SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30与β2m结构域。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其进一步包括将所述HLAI类分子多聚化，优选多聚化成二聚体、三聚体、四聚体和五聚体中的一种。

14.根据权利要求13所述的方法，其中使用识别HLA I类分子上的相应标签的抗体将所述HLA I类分子二聚化。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述标签是在α3结构域C'末端的6xHis标签，优选通过柔性接头例如GS接头连接。

16.一种用于生产与预选肽复合的HLA I类分子的试剂盒，包含与现有肽复合的哺乳动物衍生的HLA I类分子和对应于权利要求1所述的方法的说明书。

17.根据权利要求16所述的试剂盒，其进一步包含所述预选肽。

18.一种多肽，其包含HLA I类分子的α1、α2和α3结构域、N末端处的信号肽和C末端处的由GS接头连接的6xHis标签。