[发明专利]通过质谱法鉴定和定量抗体药物缀合物中的缀合肽

权利要求书

1.一种用于分析抗体药物缀合物中的位点占用比率的方法，所述方法包括：

(i)电离包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品，以形成所述抗体药物缀合物化合物和所述肽的自由基离子片段；

(ii)检测与所述自由基离子片段相关联的质荷比；以及

(iii)分析所述自由基离子片段的所述质荷比，以确定所述抗体药物缀合物化合物中的占用位点与未占用位点的位点占用比率。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括鉴定所述样品中的所述肽。

3.根据权利要求1所述的方法，还包括定量所述样品中的所述肽。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述肽包含缀合肽和未缀合肽。

5.根据权利要求4所述的方法，还包括通过确定缀合肽与未缀合肽的比率来定量所述样品的位点占用比率。

6.一种用于分析抗体药物缀合物中的位点占用比率的方法，所述方法包括：

(i)提供包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品；

(ii)将所述样品暴露于脱盐中；

(iii)将所述样品暴露于多酶消化中；

(iv)电离所述样品以形成所述抗体药物缀合物化合物和所述肽的自由基离子片段；

(v)检测与所述自由基离子片段相关联的质荷比；以及

(vi)分析所述自由基离子片段的所述质荷比，以确定所述抗体药物缀合物化合物中的占用位点与未占用位点的位点占用比率。

7.根据权利要求6所述的方法，还包括鉴定所述样品中的所述肽。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述肽包含缀合肽和未缀合肽。

9.根据权利要求8所述的方法，还包括选择所述自由基离子片段的两组独立的质荷比。

10.根据权利要求9所述的方法，其中第一组质荷比与所述缀合肽的所述自由基离子片段相关联。

11.根据权利要求9所述的方法，其中第二组质荷比与所述未缀合肽的所述自由基离子片段相关联。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中选择所述两组独立的质荷比基于已知离子片段化模式进行。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述已知离子片段化模式存储在库中。

14.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，还包括定量所述样品中的所述肽。

15.根据权利要求14所述的方法，还包括通过确定缀合肽与未缀合肽的比率来定量所述样品中的位点占用比率。

16.根据权利要求6至15中任一项所述的方法，其中所述多酶消化包括第一酶和第二酶。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述第一酶是胰蛋白酶/Lys C。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述胰蛋白酶/Lys C与样品的比率为约1:25(w/w)。

19.根据权利要求16所述的方法，其中所述第二酶是Asp N。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述Asp N与样品的比率为约1:100(w/w)。