[发明专利]通过质谱法鉴定和定量抗体药物缀合物中的缀合肽

说明书

本公开涉及一种用于对来自抗体药物缀合物(ADC)化合物中的缀合肽进行定性和定量分析的流线型完整工作流程。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年3月2日提交的美国临时申请No.62/302,333的权益和优先权，该申请的全部内容以引用方式并入本文。

技术领域

本公开涉及一种用于对来自抗体药物缀合物(ADC)化合物中的缀合肽进行定性和定量分析的流线型完整工作流程。

背景技术

抗体药物缀合物(ADC)化合物代表一类不断增长的免疫缀合物疗法。ADC化合物是由单克隆抗体构成的复合分子，所述单克隆抗体经由可裂解接头(例如，酸不稳定接头、蛋白酶可裂解接头和二硫化物接头)或不可裂解接头连接到具有生物活性的高细胞毒性药物上。有效药物与单克隆抗体的缀合使得能够将毒性有效载荷靶向递送到肿瘤表面，同时使对健康组织的全身毒性作用最小化，从而改善这类癌症治疗方式的治疗窗口。

缀合过程不完全可产生游离或非缀合药物、药物-接头或药物相关杂质。另外，降解产物可随时间在制剂中以及在体内出现。因此，对ADC进行结构表征和定性分析都具有挑战性。

传统上，使用UV方法完成了缀合肽的定量和位点占用比率测定。UV定量的缺点包括灵敏度低、选择性不足以及分析时间相对长。与基于UV的方法相比，基于MS的定量可提供更高的选择性和灵敏度。然而，迄今为止，生物制药行业仍然缺乏能够有效鉴定和定量ADC肽的完整工作流程。

发明内容

本公开涉及一种用于对来自抗体药物缀合物(ADC)化合物中的缀合肽进行定性和定量分析的流线型完整工作流程。

因此，本文提供了用于分析抗体药物缀合物中的位点占用比率的方法。该方法的一个实施例包括两个步骤。一个步骤涉及电离包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品。电离的作用是形成抗体药物缀合物化合物和肽的自由基离子片段。另一个步骤涉及检测与自由基离子片段相关联的质荷比。

该方法的另一个实施例包括至少三个步骤。一个步骤涉及提供包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品。另一个步骤涉及将样品暴露于脱盐中。另一个步骤涉及将样品暴露于多酶消化中。然后电离包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品。电离的作用是形成抗体药物缀合物化合物和肽的自由基离子片段。随后，检测与自由基离子片段相关联的质荷比。

该方法的又一个实施例包括三个步骤。一个步骤涉及电离包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品。电离的作用是形成抗体药物缀合物化合物和肽的自由基离子片段。另一个步骤涉及检测与自由基离子片段相关联的质荷比。另一个步骤涉及选择自由基离子片段的两组独立的质荷比。第一组质荷比可与缀合肽的自由基离子片段相关联。第二组质荷比可与未缀合肽的自由基离子片段相关联。

该方法的再一个实施例包括三个步骤。一个步骤涉及电离包含抗体药物缀合物化合物和肽的样品。电离的作用是形成抗体药物缀合物化合物和肽的自由基离子片段。另一个步骤涉及检测与自由基离子片段相关联的质荷比。另一个步骤涉及监测自由基离子片段的两组独立的质荷比。第一组质荷比可与缀合肽的自由基离子片段相关联。第二组质荷比可与未缀合肽的自由基离子片段相关联。

本文提供的方法使得能够分析自由基离子片段的质荷比，以确定抗体药物缀合物化合物中的占用位点与未占用位点的位点占用比率。

本文提供的方法的上述实施例具有以下一个或多个优点。例如，某些实施例提供了一种流线型工作流程，其消除了用于鉴定和定量ADC肽的复杂步骤。某些其他实施例提供了比之前的工作流程更高的选择性和灵敏度。

附图说明

图1是示出本发明的方法的一个实施例的示意图。

图2是示出本发明的方法的替代实施例的示意图。