[发明专利]产生重组蛋白的方法有效
| 申请号： | 201780028031.X | 申请日： | 2017-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN109071611B | 公开（公告）日： | 2022-11-01 |
| 发明（设计）人： | R.A.埃明斯;G.B.芬卡;M.霍尔;A.P.刘易斯;W.J.K.刘易斯;A.D.麦基纳利;M.尤登;I.武尔加里斯 | 申请（专利权）人： | 葛兰素史克知识产权开发有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/245 | 分类号： | C07K14/245;C12N15/70 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 李唐;周齐宏 |
| 地址： | 英国米德*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 产生 重组 蛋白 方法 | ||
1.重组信号肽，其包含：(a)序列MGRISSGG (SEQ ID NO: 1)，和(b)在(a)的C端的异源信号序列，其中所述异源信号序列是大肠杆菌周质信号序列。
2.重组融合蛋白，其包含(a)权利要求1的重组信号肽；和(b)在(a)的C端的异源重组蛋白。
3.重组核酸，其编码权利要求1的重组信号肽或如权利要求2中所定义的重组融合蛋白。
4.权利要求3的重组核酸，其中所述核酸已经密码子优化用于在宿主细胞中表达。
5.权利要求4的重组核酸，其中密码子优化的核酸编码信号肽，所述信号肽包含序列MGRISSGGMKKTAIAIAVALAGFATVAQA (SEQ ID NO: 55)。
6.权利要求3至5中任一项的重组核酸，其中所述核酸已经密码子优化用于在宿主细胞中表达，且具有0.40或更高的密码子适应指数。
7.重组表达载体，其包含权利要求3至6中任一项的核酸。
8.根据权利要求7所述的重组表达载体，其中所述信号肽可操作地连接至所述重组蛋白。
9.用于在宿主细胞中产生重组蛋白的方法，其包括：
(a)在允许从存在于所述宿主细胞中的根据权利要求7或8所述的重组表达载体表达所述重组蛋白的条件下培养所述宿主细胞；和
(b)回收所述重组蛋白。
10.用于降低表达重组蛋白的宿主细胞培养液的粘度的方法，其包括：
在允许表达所述重组蛋白的条件下培养所述宿主细胞，其中所述宿主细胞包含重组核酸，所述重组核酸编码：(i)重组信号肽，其包含(a)序列MGRISSGG (SEQ ID NO: 1)和(b)在(a)的C端的异源信号序列，其中所述异源信号序列是大肠杆菌周质信号序列，和(ii)所述重组蛋白。
11.用于降低通过宿主细胞培养液表达重组蛋白的基础表达的方法，其包括：在诱导前条件下培养所述宿主细胞，
其中所述宿主细胞包含重组核酸，所述重组核酸编码：(i)重组信号肽，其包含(a)序列MGRISSGG (SEQ ID NO: 1)和(b)在(a)的C端的异源信号序列，其中所述异源信号序列是大肠杆菌周质信号序列，和(ii)所述重组蛋白。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述核酸如权利要求3至6中任一项所定义。
13.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述重组蛋白从周质或胞外培养基回收。
14.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述信号肽可操作地连接至所述重组蛋白。
15.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述重组蛋白的诱导前表达水平为≤0.5g/L；和/或所述重组蛋白的诱导后表达水平为≥5g/L。
16.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述信号肽从所述重组蛋白切割。
17.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述重组蛋白为抗原结合蛋白。
18.根据权利要求9至11中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞为具有周质的微生物细胞。
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