[发明专利]产生重组蛋白的方法

说明书

本发明涉及来源于大肠杆菌的重组信号序列。本发明还涉及包含该信号序列、重组蛋白的融合蛋白和产生该重组蛋白的方法。重组信号序列可用于提供用于控制发酵的粘度和/或控制重组蛋白的基础(诱导前)表达的方法。

本发明涉及重组信号序列和包含该信号序列以及一种重组蛋白的融合蛋白。描述了使用重组信号序列产生重组蛋白的方法。具体而言，重组信号序列提供用于控制发酵的粘度和/或控制重组蛋白的基础(诱导前)表达的方法。

发明背景

重组蛋白的大规模且节约成本的制备、回收和纯化对于生物技术产业是重要的挑战。

微生物宿主细胞是用于产生重组蛋白的广泛使用的生物。在生产期间的考量包括宿主细胞生长和重组蛋白的表达、蛋白滴度、蛋白位置(例如，细胞内、细胞外、周质等)，以及从最终位置的选择性回收和纯化重组蛋白。平衡和优化这些不同因素并不简单。

革兰氏阴性真细菌大肠杆菌(Escherichia coli，E. coli)为用于工业生物过程的稳健表达系统，这是归因于：其良好表征的遗传学；其使用廉价底物能快速积聚生物量的能力；易于工艺规模放大和大量可用的宿主菌株和表达载体。大肠杆菌是用于产生不需要复杂翻译后修饰诸如糖基化的治疗蛋白的常用宿主。对于二硫键形成，可将表达引导至周质的氧化环境中以便于正确折叠。这可通过使用N端信号序列来实现，所述N端信号序列由细胞的分泌系统的成分识别以起始其通过专用转运系统的靶向和通过。

因此，存在对于生产、回收和纯化重组蛋白的改进方法的需要。

发明概述

本发明提供了重组信号序列，其包含(a)序列MGRISSGG (SEQ ID NO: 1)或其通过1、2或3个氨基酸取代、缺失或插入而在序列上不同的变体和(b)在(a)的C端的异源信号序列。

本发明还提供了重组融合蛋白，其包含(a)如所定义的信号序列；和(b)在(a)的C端的异源重组蛋白。

本发明还提供了重组核酸序列，其编码如所定义的信号序列或融合蛋白。

本发明还提供了重组核酸序列，其编码包含序列MGRISSGG (SEQ ID NO: 1)的信号序列，其中所述核酸序列已经密码子优化用于在宿主细胞中表达。

本发明还提供了包含如所定义的核酸序列的重组表达载体。

本发明还提供了用于在宿主细胞中产生重组蛋白的方法，所述方法包括：

(a)在允许从存在于宿主细胞中的如所定义的重组表达载体表达重组蛋白的条件下培养宿主细胞；和

(b)回收重组蛋白。

本发明还提供了用于控制表达重组蛋白的宿主细胞培养液的粘度的方法，其包括：

在允许表达重组蛋白的条件下培养宿主细胞，其中所述宿主细胞包含重组核酸序列，所述重组核酸序列编码：(i)重组信号序列，所述重组信号序列包含序列MGRISSGG (SEQID NO: 1)或其通过1、2或3个氨基酸取代、缺失或插入而在序列上不同的变体，和(ii)重组蛋白。

本发明还提供了用于控制通过宿主细胞培养液表达的重组蛋白的基础表达的方法，其包括：在诱导前条件下培养宿主细胞，

其中所述宿主细胞包含重组核酸序列，所述重组核酸序列编码：(i)重组信号序列，所述重组信号序列包含序列MGRISSGG (SEQ ID NO: 1)或其通过1、2或3个氨基酸取代、缺失或插入而在序列上不同的变体，和(ii)重组蛋白。

附图描述