[发明专利]经标记的核苷酸组合物及用于核酸测序的方法

权利要求书

1.经发光标记的核苷酸，其包含一个或多个发光标记，所述发光标记经由核酸连接至一个或多个多磷酸核苷，其中所述核酸包含保护组件。

2.如权利要求1的经发光标记的核苷酸，其中所述核酸为单链的。

3.如权利要求1的经发光标记的核苷酸，其中所述核酸为双链的。

4.如权利要求3的经发光标记的核苷酸，其中所述核酸包含：

第一寡核苷酸链，其包含所述一个或多个发光标记，所述发光标记连接在沿着所述第一寡核苷酸链的任一侧上具有一个或多个核苷酸的内部位置处；及

第二寡核苷酸链，其包含所述一个或多个多磷酸核苷，其中所述第二寡核苷酸链退火至所述第一寡核苷酸链。

5.如前述权利要求中任一项的经发光标记的核苷酸，其中所述两个或更多个多磷酸核苷经由包含多个胸苷核苷酸的连接子连接至所述核酸。

6.如权利要求5的经发光标记的核苷酸，其中所述连接子包含分支链连接子。

7.如前述权利要求中任一项的经发光标记的核苷酸，其中所述保护组件包含至少一个能量吸收修饰。

8.如权利要求7的经发光标记的核苷酸，其中所述至少一个能量吸收修饰包含三重态淬灭剂。

9.如权利要求7的经发光标记的核苷酸，其中所述至少一个能量吸收修饰包含树枝状修饰。

10.如权利要求7的经发光标记的核苷酸，其中所述至少一个能量吸收修饰包含单糖-TEG、二糖、N-乙酰基单糖、TEMPO-TEG、trolox-TEG或甘油树状体。

11.如前述权利要求中任一项的经发光标记的核苷酸，其中所述保护组件包含一或多个未标记茎-环。

12.如权利要求11的经发光标记的核苷酸，其中所述一个或多个发光标记中的至少一者连接至茎-环的环，其通过所述一个或多个未标记茎-环与所述一个或多个多磷酸核苷分离。

13.如权利要求4至12中任一项的经发光标记的核苷酸，其进一步包含第三寡核苷酸链，其退火至第一和第二寡核苷酸链中的至少一者。

14.如权利要求13的经发光标记的核苷酸，其进一步包含第四寡核苷酸链，其退火至第一、第二及第三寡核苷酸链中的至少一者。

15.如权利要求13的经发光标记的核苷酸，其中所述寡核苷酸链形成霍利迪连结体。

16.测定模板核酸的序列的方法，其包含：

(i)使目标体积中的复合物曝露于多个类型的经发光标记的核苷酸，所述复合物包含所述模板核酸、引物及聚合酶，其中各类型的经发光标记的核苷酸包含权利要求1的经发光标记的核苷酸；

(ii)将一系列一或多个激发能的脉冲引向所述目标体积附近；

(iii)在连续并入包含所述引物的核酸期间，检测自经发光标记的核苷酸的多个发射光子；及

(iv)藉由测定所述发射光子的时序和任选的频率，鉴别并入的核苷酸的序列。