[发明专利]蛋白酶抗性的单-脂化肽

说明书

本发明提供了蛋白酶抗性的肽、制备此类肽的方法、以及包含蛋白酶抗性的肽的组合物和利用此类肽进行治疗的方法。已经确定对某些氨基酸残基的脂化和用替代性氨基酸对天然氨基酸和添加至肽链的另外的氨基酸的取代的组合以产生蛋白酶抗性的肽。

背景技术

本披露提供了蛋白酶抗性的肽、制备此类肽的方法、以及包含蛋白酶抗性的肽的组合物和利用此类肽进行治疗的方法。在此描述了在肽序列中的某些位置处对氨基酸的脂质修饰。

长效肽疗法的开发受以下因素阻碍，例如短血浆半衰期和口服生物利用度较差，主要是肽对酶降解的天然敏感性的结果。大部分蛋白水解功能是必要的，包括调节基本的生物分子过程，例如关闭在细胞表面的肽信号传导事件、或在消化过程中蛋白质和肽的胃分解。因此，在许多情况下，不能简单地抑制负责的蛋白酶的活性，而不引起其他代谢紊乱。

因此为了克服降解，增强感兴趣的肽的酶抗性是所希望的。通常，利用两种方法来增强酶抗性：序列特异性修饰，例如影响肽本身的一级结构的那些；以及整体有效修饰，例如改变肽的某些总体物理化学特征的那些。策略上引入的此类修饰可以降低自然生理过程的影响，否则这些过程就会消除或失活其作用是所希望的肽，例如酶降解和/或通过肾超滤的清除。

序列特异修饰包括蛋白水解抗性的特殊氨基酸的掺入，或更复杂的修饰，包括天然存在的侧链功能之间的环化例如二硫键形成(Cys-Cys)、或内酰胺化(Lys-Glu或Lys-Asp)。另外的修饰包括在肽主链之内的非天然氨基酸替代物之间的环化，例如烯烃复分解钉合(stapling)。

整体修饰包括过程例如肽脂化，例如棕榈酰化和/或聚乙二醇化。棕榈酰化具有产生肽的循环储器的作用，该肽在血液血清中与天然丰富的白蛋白可逆地缔合。与白蛋白缔合的肽有效地逃过肾超滤，因为缔合的复合物的尺寸高于肾小球滤过截取值。当该肽从白蛋白的表面解离时，其再次游离，以便与内源受体相互作用。聚乙二醇化具有物理地屏蔽肽免于蛋白水解的作用并赋予显著亲水性，当水合时该亲水性大大增加治疗性分子的流体动力学半径以克服肾清除。

虽然这些技术总体上可以广泛适用于治疗性肽，并在某一程度能够延伸循环半衰期，但仍然存在着对于增加肽和蛋白质对酶降解的稳定性的方法的需要，特别是鉴于产生适用于口服给予的肽的期望时。

发明内容

本披露提供了一种分离的多肽，该分离的多肽包含如下氨基酸序列：X0-H-X2-X3-GT-FTSD-X10-S-X12-X13-X14-X15-X16-X17-AA-X20-X21-X22-I-X24-X25-X26-X27-X28-X29-X30-X31-X32(SEQ ID NO：2)；其中X0是无、A、E、F、I、L、V或T；X2是A、Aib或d-Ser；X3是E或I；X10是S或脂质修饰的K；X12是S或脂质修饰的K；X13是Y或脂质修饰的K；X14是L或脂质修饰的K；X15是E或脂质修饰的K；X16是G或脂质修饰的K；17是E、Q、或脂质修饰的K；X20是E、K、R、或脂质修饰的K；X21是E或脂质修饰的K；X22是F、Cha、4Me-Phe、Bip、Dip、2-CF3-Phe、4-CF3-Phe、Nle或脂质修饰的K；X24是A、E、Cha、Bip、Dip、Nle、或脂质修饰的K；X25是W、Cha、Nle、NMe-Trp、αMe-Trp、或脂质修饰的K；X26是L或脂质修饰的K；X27是V或脂质修饰的K；X28是K、E、R或脂质修饰的K；X29是G或Aib；X30是R、E、或G；X31是G、无、或脂质修饰的K；X32是无或脂质修饰的K；并且其中该多肽仅在X10、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X20、X21、X22、X24、X25、X26、X27、X28、X31或X32中的一者上被脂化。

在某些实施例中，该肽包含C-末端酰胺。在其他实施例中，该肽包含C-末端酸。