[发明专利]分离有核细胞和有核细胞群的方法及其应用

权利要求书

1.一种将血液来源的有核细胞富集级分中存在的目标有核细胞的群与无核红细胞分离的方法，所述有核细胞富集级分含有不超过20％的来自血液的无核红细胞，所述方法包括对所述有核细胞富集级分进行以下步骤中的至少一种：

a)针对所述目标有核细胞的阴性选择；

b)针对所述目标有核细胞的阳性选择；和

c)密度梯度离心，

从而分离目标有核细胞的群。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述有核细胞富集级分含有：

a)至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的来自血液的有核细胞；和/或

b)不超过15％、不超过10％、不超过5％、或不超过1％的来自血液的无核红细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述有核细胞富集级分是包括以下步骤的方法的产物：

a)在局部重力下在容器的内腔中将包含有核细胞、无核红细胞和凝集剂的混合物分离成有核细胞富集级分和无核红细胞富集级分，其中所述分离分批进行，并且其中

i.所述内腔中所述混合物的平均高度不超过4cm；和/或

ii.对所述内腔中所述混合物的平均高度进行选择，从而在不超过3轮、不超过2轮或不超过1轮分离之后提供无核红细胞富集级分，其含有所述混合物中至少80％的所述无核红细胞和/或所述混合物中不超过20％的所述有核细胞；

b)可选地重复步骤(a)一次或多次；和

c)可选地洗涤所述有核细胞富集级分一次或多次。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述洗涤包括浓缩所述有核细胞富集级分的细胞，并将经浓缩细胞与包含血浆的溶液合并，可选地，其中所述血浆是自体血浆。

5.如权利要求3或4所述的方法，其中，所述内腔中所述混合物的平均高度为：

a)不超过4cm，不超过3.5cm，不超过3cm，不超过2.5cm，不超过2cm，不超过1.5cm，或不超过1cm；和/或

b)至少0.5cm或至少1cm。

6.如权利要求3至5中任一项所述的方法，其中，所述混合物的体积为：

a)小于500mL，小于400mL，小于300mL，小于200mL，小于100mL，小于75mL，小于50mL，小于40mL，小于30mL或小于25mL；

b)至少5mL，至少10mL，至少20mL或至少25mL；

c)a)和b)的任何组合；或

d)25mL至50mL，50mL至100mL，100mL至200mL，或200mL至400mL。

7.如权利要求3至6中任一项所述的方法，其中，所述凝集剂是葡聚糖、羟乙基淀粉(HES)、明胶、喷他淀粉、蔗聚糖、阿拉伯胶、聚乙烯吡咯烷酮、5-(N-2,3-二羟基丙基乙酰氨基)-2,4,6-三碘-N,N'-双(2,3-二羟基丙基)间苯二甲酰胺或其任何组合。

8.如权利要求3至7中任一项所述的方法，其中，所述分离进行2至15分钟，2至10分钟，2至5分钟，3至6分钟，4至12分钟，5至10分钟，2至8分钟，4至10分钟，3至7分钟，6至10分钟或5至8分钟。

9.如权利要求3至8中任一项所述的方法，其中，所述容器的所述内腔：

a)具有固定体积；

b)包括漏斗形部分；

c)包括圆柱形部分或多面体部分，可选地，其中所述圆柱形部分或多面体部分：

(i)在底端连接至漏斗形部分；

(ii)在一个顶端连接至倒置的漏斗形部分；或

(iii)在底端连接至漏斗形部分，并且在顶端连接至倒置的漏斗形部分；

或者

d)a)-c)的任何组合。