[发明专利]用于蛋白生产的脂质代谢的调节

说明书

本公开内容涉及用于调节脂质代谢以实现改善重组产品(如新一代生物制品)的产量和质量的方法和组合物。如本申请所述的调节脂质代谢包括例如向细胞或无细胞系统引入本申请所述的脂质代谢调节剂。本公开内容还包括具有改进的生产能力和改进的产品质量的经工程化改造的细胞，用于对此类细胞进行工程化改造的方法，以及包含来自此类细胞的产品的制品和混合物。

相关申请

本申请要求2016年5月3日提交的美国临时申请序号62/330973的优先权，其全部内容通过引用整体并入本申请。

技术领域

本公开内容涉及用于调节细胞的脂质代谢途径的方法和组合物，以及用于生产产品(例如，重组蛋白)的经工程化改造的细胞和细胞系。

背景技术

重组治疗性蛋白通常在细胞表达系统(例如，哺乳动物细胞表达系统)中表达。在2014年，批准上市的生物药品总数为212个，FDA批准上市的治疗性产品中有56％是在哺乳动物细胞系中生产的。然而，与生产相关的高成本促使了总体健康成本的增加。

此外，诸如新一代融合蛋白、多聚体糖蛋白或新一代抗体的新一代蛋白生物制品(NGB)通常具有复杂的和/或非天然的结构，并且已证明其比诸如单克隆抗体的分子更加难以表达。目前宿主细胞系尚未进化出有效合成和分泌NGB的途径，导致生长显著减少、生产力较低以及通常导致生产出质量较差的产品。因而，认为这些NGB难以表达，其生产力和产品质量难以满足临床和市场需求。

因此，越来越需要快速、有效和经济地开发和生产重组生物治疗剂，同时保持最终产品的质量。

发明内容

本公开内容部分地基于以下发现：通过过表达一个或多个脂质代谢途径的组分调节脂质代谢途径提高生产重组多肽产品的细胞的生产力和产品质量。这里，证明了可以将调节脂质代谢(例如，通过调节一个或多个脂质代谢途径)用于工程化改造生产具有更高产率的产品和具有改善的质量的产品的细胞和无细胞系统。重要的是，本公开内容的特征在于通过使用调节与脂质代谢相关的一个以上过程或途径的总体调控因子对脂质代谢进行总体调控，从而产生多种下游效应以实现改善的产品产量和质量。本申请所述的方法和组合物对于改善重组产品或新一代生物制品(例如，融合蛋白、双特异性或多形式抗体分子、多聚体蛋白和糖基化蛋白)的生产，以及用于生产此类产品的更有效系统(例如，细胞系或无细胞系统)的开发特别有用。

在一个方面中，本公开内容涉及一种用于在细胞中生产本申请所述的产品的方法。在一个实施方式中，所述产品是多肽，例如重组多肽。在一个实施方式中，所述方法包括提供包含调节脂质代谢的修饰的细胞，并且培养所述细胞(例如，在适于通过所述修饰调节脂质代谢的条件下)，从而生产所述产品。

在另一个方面中，本公开内容涉及一种用于在无细胞系统中生产产品(例如，多肽，例如重组多肽)的方法，所述方法包括：提供包含调节脂质代谢的修饰的无细胞系统(例如，来自包含调节脂质代谢的修饰的细胞或细胞系的无细胞系统)，并将所述无细胞系统置于适于生产所述产品的条件下；从而生产所述产品(例如，多肽，例如重组多肽)。在一个实施方式中，所述无细胞系统来自包含调节脂质代谢的修饰的细胞或细胞系。在一个实施方式中，所述无细胞系统包含来自含有调节脂质代谢的修饰的细胞或细胞系的一个或多个组分(例如，细胞器或细胞器的一部分)。在一些实施方式中，所述修饰包含编码脂质代谢调节剂(LMM)的外源性核酸以及其中所述细胞或细胞系表达LMM(例如，选自下组的LMM：SREBF1、SREBF2、SCD1、SCD2、SCD3、SCD4、SCD5)或其功能性片段。在一些实施方式中，LMM改变选自下组的无细胞系统的一个或多个特征：增肌所述产品(例如多肽，例如所生产的重组多肽(NGB))的生产(例如，产量和生产速率)；以及增加所述产品的质量(例如，减少聚集、降低糖基化异质性、减少片段化和增加正确折叠与错折叠或未折叠产品的比例)。