[发明专利]CD4CD8双阳性T细胞的制备方法

说明书

本发明提供一种CD4CD8双阳性T细胞的制备方法，其包括以下工序：(1)在培养液中培养多能性干细胞，诱导造血祖细胞的步骤；(2)在含有p38抑制剂和/或SDF‑1的培养液中培养上述步骤(1)中得到的造血祖细胞，诱导CD4CD8双阳性T细胞的步骤。

技术领域

本发明涉及从造血祖细胞制备CD4CD8双阳性T细胞的方法、从多能性干细胞制备CD4CD8双阳性T细胞的方法、以及从该CD4CD8双阳性T细胞制备CD8阳性T细胞的方法。

背景技术

认为T细胞在针对细菌或病毒等外来病原体或癌细胞等异常细胞的免疫系统中发挥中心作用，但由于各种原因而T细胞的功能发生降低，而变为易感染性或罹患癌症等。如果能够对于这样的疾病进行免疫细胞等的补充、再生，则会成为对于疾病的病情改善或治疗效果的提高等极为有效的手段。在这样的免疫细胞的补充疗法中，强烈要求负责细胞免疫的T淋巴细胞的功能补充、再生，但现在尚未建立有效的治疗方法。

作为这样的T淋巴细胞的补充疗法，提出了将抗原特异性的T细胞受体(TCR)基因在各种淋巴细胞类细胞中进行基因导入，而补充或赋活*特异性免疫反应的方案(非专利文献1或2)。在这些尝试中，作为基因导入细胞，使用了作为骨髓祖细胞的CD34阳性细胞、天然T淋巴细胞等，但存在许多问题：它们在Ex-vivo中的自我再生能力低、基因导入的效率低、难以进行基于基因导入的分化的调节等。

另外，也提出了使用了从iPS细胞等多能性干细胞诱导而成的T淋巴细胞的补充疗法(非专利文献3或专利文献1)。在从多能性干细胞诱导T淋巴细胞的方法中，提出了(1)从多能性干细胞诱导造血祖细胞的步骤、(2)从造血祖细胞诱导CD4CD8双阴性细胞的步骤、(3)从CD4CD8双阴性细胞诱导CD4CD8双阳性细胞的步骤、以及(4)从CD4CD8双阳性细胞诱导T淋巴细胞的步骤。

对于(1)的步骤，已知从多能性干细胞形成网状结构物Sac(ES-sac)来制备造血祖细胞的方法(非专利文献4)。另外，对于(2)和(3)的步骤，已知在OP9-DL1细胞层上用添加了IL-7和Flt-3L的培养基进行培养的方法(非专利文献5或6)。此外，对于(4)的步骤，已知用添加了抗CD3抗体(OKT-3)和IL-2的培养基进行培养的方法。

另外，专利文献2中公开了利用添加了维生素C类的培养液从多能性干细胞制备CD4CD8双阳性T细胞的方法。

但是，利用这些方法从多能性干细胞制备T淋巴细胞的效率并不充分，希望进行改良。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO 2011/096482

专利文献2：WO 2016/076415

非专利文献

非专利文献1：Gattinoni L,et al.,Nat Rev Immunol.6(5):383-393,2006非

专利文献2：Morgan RA,et al.,Science.314(5796):126-129,2006

非专利文献3：Nishimura T,et al.,Cell Stem Cell.12(1):114-126,2013.

非专利文献4：Takayama N,et al.,Blood.111(11):5298-5306,2008

非专利文献5：Timmermans F,et al.,J Immunol.182(11):6879-6888,2009

非专利文献6：Ikawa T,et al.,Science.329(5987):93-96,2010

发明内容

发明要解决的问题