[发明专利]来自爪钩草属植物的细胞系培养物

权利要求书

1.H.procumbens细胞系，由如下步骤产生：

a.将H.probumbens细胞接种到适合悬浮细胞生长的液体培养基中；

b.在适于悬浮细胞生长的条件下培养所得细胞；

并且可选地：

c.通过周期性地分割任何紧密的团块，将所述细胞重悬于新鲜培养基中或加入新鲜培养基，并维持适于悬浮细胞持续生长的条件，来维持悬浮培养所得细胞；或

d.将所得细胞保存为细胞系，可选通过冷冻保存所述细胞的样品。

2.如权利要求1所述的细胞系，其中步骤a中使用的细胞作为来自愈伤组织的材料样品提供，所述愈伤组织由以下步骤产生：

i)以H.procumbens的灭菌种子体外产生秧苗；

ii)从所述秧苗中提取至少一个茎节间；

iii)通过在固体培养基上培养所述节间诱导愈伤组织形成，所述培养基和培养条件适合于愈伤组织产生；

iv)在固体培养基上培养由步骤c得到的愈伤组织，所述培养基和培养条件适合于愈伤组织生长；

并且可选地：

v)通过定期将愈伤组织的健康部分转移到新鲜的固体培养基中，并维持适合愈伤组织生长的条件，来维持培养步骤d得到的愈伤组织；或

vi)通过冷冻所述愈伤组织的健康部分的样品来储存所得的愈伤组织，

优选地，其中愈伤组织材料与培养基比例在1：2和1:10w/w之间。

3.如权利要求1和2中任一项所述的细胞系，其中步骤a和/或c的培养基是补充有至少一种细胞分裂素、至少一种生长素，和糖的MS或GB5培养基，所述生长素不是2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)，其中细胞分裂素优选为6-苄氨基嘌呤(BAP)，生长素优选为α-萘乙酸(NAA)，糖优选为蔗糖。

4.如权利要求3所述的细胞系，其中步骤a和/或c的培养基中细胞分裂素：生长素的比例各自独立地为2：1至20：1。

5.如权利要求3和4中任一项所述的细胞系，其中步骤a中的培养基补充有5mg/ml BAP，1mg/ml NAA和30g/l蔗糖，并且/或步骤c中的培养基补充有2mg/ml BAP，0.1mg/ml NAA和30g/l蔗糖。

6.如前述权利要求中任一项所述的细胞系，其中步骤b和c中的条件包括在黑暗中，约22至28℃，用轨道振荡或在波反应器上培养，并且/或其中步骤c中大约每2-3周进行一次周期性重悬或添加培养基。

7.如前述任一项权利要求所述的细胞系，其中所述培养基具有如下表所示的宏量和微量元素和维生素组合物：

表A：

或表B:

8.一种H.procumbens细胞系，保藏于NCIMB保藏机构，登录号为NCIMB 42467。

9.一种植物提取物，其根据从H.procumbens的细胞中提取一种或多种苯乙醇苷的方法制备，该方法包括在培养基中获得所述细胞的样品，从所述细胞产生包含一种或多种苯乙醇苷的植物提取物，并且可选地从所述植物提取物分离一种或多种苯乙醇苷，优选毛蕊花苷，可选地其中提取物中苯乙醇苷类的产量为至少5％w/w，毛蕊花苷的产量为至少3％w/w，并且2-O-乙酰基阿克替苷的产量为提取物的至少1.5％w/w。

10.如权利要求9所述的植物提取物，其中所述细胞样品是从在H.procumbens细胞中产生次级代谢产物的方法得到的培养基中获得的，该方法包括在适合于所述细胞生长的条件下，在培养基中首先悬浮培养H.procumbens细胞，随后改变培养条件和/或培养基，使得它们适于由所述细胞产生次级代谢产物。