[发明专利]来自爪钩草属植物的细胞系培养物

说明书

本发明涉及爪钩草植物细胞培养物、细胞系和提取物，以及它们的制备方法和用途。

技术领域

本发明涉及爪钩草(Harpagophytum procumbens)植物细胞培养物，细胞系和提取物，以及它们的制备方法和用途。

背景技术

爪钩草是芝麻科或芝麻家族中的一个属的植物。最常见的叫做魔鬼爪或猫爪草，它是一种杂草，具有视觉上引人注目的果实的多年生的块茎植物(Mncwangi et al.,2012；Journal of Ethnopharmacology 143 p775-771)。Harpagophytum procumbens(H.procumbens)(Burch.)DC.Ex Mesin原产于南非的喀拉哈里沙漠地区，被认为具有很高的药用价值(Gyurkovska et al.,2011 Food Chemistry 125 p171-178)，其植物的次生块茎因其药用特性而被收获。从H.procumbens中分离出多达36种化合物(Mncwangi,2012)；然而，没有报道化学物是从整个植物还是从次生块茎中分离出来的。数千年来，H.procumbens块茎已经被用作草药治疗超过30种医学疾病，并且已被证明具有强烈的抗炎特性(Georgiev et al.,2010；Food Chemistry 121 p967-972)。

在纳米比亚，野生收获H.procumbens是许多农村社区的生计。对这种药用植物的需求增加为初级生产者带来了更多的机会，但也使自然资源紧张。根据1975年纳米比亚的“自然保护条例”，H.procumbens于1977年被列为受保护物种。就该条例而言，需要许可才能收获和出口H.procumbens。它也受到博茨瓦纳和南非的类似立法的保护。由知识渊博的收获者进行的野外收获往往能够保护物种，但随着需求的增加以及财务动机，导致了更多(且知识较少)的收获者的过度收获，这对H.procumbens的资源库产生了重大影响。在纳米比亚，据说每公顷只剩下一株植物，而以前在天然群体中有1000-2000株植物。因此，基于1975年“自然保护条例”进行更严格的规定和保护，前环境和旅游部于1977年将H.procumbens(当地称为gamagu)列为受保护物种。

已经证明难以培养H.procumbens以取代野生收获的需要，并且无论如何不能保证来自野生和栽培植物的生物活性化合物的产量。产量完全取决于它们的植物类型和所经历的生长条件，并且即使当环境因素针对栽培植物进行优化时也不能消除波动。此外，尽管据报道通过细胞培养技术生产H.procumbens植物材料(Georgiev，2010)，但由于再现性和感染发生率的问题，所用的方法不适合用于生物活性化合物的工业生产。最后，不管植物材料的来源如何，以商业上可行的量和适合使用的形式从H.probumbens中提取生物活性化合物存在进一步的困难。

因此，需要制备钩爪草植物材料的替代方法，和从所述材料中提取生物活性化合物的替代方法。

发明内容

本发明人发现可以通过细胞培养技术生产H.procumbens，从而避免了收获野生或栽培植物的需要。本发明的方法提供愈伤组织和悬浮培养物，并且特别适合于按比例放大到工业生产水平。本发明人还制备了稳定的H.procumbens细胞系，其特别适用于这些方法。

本发明人进一步开发了一种在H.procumbens培养细胞中生产次级代谢产物的方法，以及从所述细胞中获得植物提取物的方法，该提取物也由本发明提供。所述提取物可以是干细胞提取物。所述提取物包含商业上可行产量的特定类别的生物活性化合物，苯乙醇苷类(特别是包括毛蕊花苷)。该方法可任选地包括从提取物中分离一种或多种苯乙醇苷。提取物或包含所述提取物的组合物可用于治疗和美容(非治疗)目的。