[发明专利]活化的梭菌神经毒素的生产

权利要求书

1.生产活化的梭菌神经毒素的方法，包括使单链梭菌神经毒素与活化酶接触，直至至少90％的单链梭菌神经毒素转化为双链梭菌神经毒素。

2.根据权利要求1的方法，其中所述活化酶是胰蛋白酶。

3.根据权利要求2的方法，其中所述胰蛋白酶是牛胰蛋白酶，并且其中所述牛胰蛋白酶具有与SEQ ID NO：1具有至少90％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求3的方法，其中所述牛胰蛋白酶选自获自牛胰腺的天然胰蛋白酶和重组牛胰蛋白酶。

5.根据权利要求3或4的方法，其中使所述单链梭菌神经毒素与牛胰蛋白酶接触的所述步骤在pH5和7.5，优选6和7之间进行，例如在约pH6.5下进行。

6.根据权利要求5的方法，其中使单链梭菌神经毒素与所述牛胰蛋白酶接触的步骤在室温下在pH6和7之间进行15至25小时的持续期，并且其中所述牛胰蛋白酶的浓度为每mg梭菌神经毒素0.5和3μg之间。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，还包括去除截短的梭菌神经毒素的步骤。

8.根据权利要求7的方法，其中所述去除截短的梭菌神经毒素的步骤包括使所述活化的梭菌神经毒素与混合模式色谱树脂接触。

9.根据权利要求1至8中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素选自BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G和TeNT。

10.根据权利要求1-9中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素是与野生型肉毒杆菌神经毒素相比的经修饰的肉毒杆菌神经毒素，例如突变的梭菌神经毒素、嵌合梭菌神经毒素或重新靶向的梭菌神经毒素。

11.根据权利要求1至10中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素包括BoNT/E活化环。

12.根据权利要求1-11中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素是BoNT/E。

13.根据权利要求1至12中任一项的方法，其中所述单链梭菌神经毒素通过在异源宿主细胞，优选在大肠杆菌中表达编码所述单链梭菌神经毒素的基因而获得。

14.一种活性双链梭菌神经毒素，其能通过权利要求1-13中任一项的方法获得。

15.包含权利要求14的活性双链梭菌神经毒素的药物组合物，其中所述组合物基本上不含单链梭菌神经毒素。

16.根据权利要求15的药物组合物，其用于治疗，例如用于治疗眼科病症，运动病症，耳鼻喉科病症，胃肠道病症，泌尿生殖系统病症，皮肤病学病症，疼痛病症，炎性病症，分泌性病症，呼吸病症，肥大性病症，关节病症，内分泌病症，自身免疫疾病，增殖性疾病，创伤性损伤，兽医用途。

17.根据权利要求15的药物组合物在化妆品或美容中的用途。