[发明专利]在木霉属中生产发酵产物的方法

权利要求书

1.一种生产发酵产物的方法，该方法包括使重组里氏木霉细胞在产生异源转化酶和发酵产物的条件下、在包含蔗糖的发酵培养基中发酵，其中该重组里氏木霉细胞包含一种或多种各自编码异源转化酶的基因。

2.如权利要求1所述的方法，其中编码转化酶的该一种或多种基因中的每一种衍生自一种或多种微生物。

3.如权利要求2所述的方法，其中编码转化酶的该一种或多种基因中的至少一种是真菌基因。

4.如权利要求3所述的方法，其中编码转化酶的该一种或多种基因中的每一种与SEQID NO:1具有至少60％序列同一性，例如至少70％序列同一性，例如至少80％序列同一性，例如至少90％序列同一性，例如至少95％序列同一性，例如至少96％序列同一性；例如至少97％序列同一性；例如至少98％序列同一性；例如至少99％序列同一性。

5.如权利要求4所述的方法，其中编码转化酶的该一种或多种基因中的每一种具有SEQID NO:1的序列，或者与SEQ ID NO:1相差一个或若干个取代，优选地相差一个或若干个保守取代。

6.一种生产发酵产物的方法，该方法包括使里氏木霉细胞在生产发酵产物的条件下和在形成槐糖的条件下、在包含蔗糖和β-葡糖苷酶的发酵培养基中发酵。

7.如权利要求6所述的方法，其中将该蔗糖在pH为1-3，例如pH 2下用酸(例如乙酸、柠檬酸、盐酸、磷酸或硫酸)水解成果糖和葡萄糖。

8.如权利要求6所述的方法，其中该蔗糖被转化酶水解成果糖和葡萄糖。

9.如权利要求8所述的方法，其中该转化酶被外源添加至发酵培养基中。

10.如权利要求8所述的方法，其中该转化酶由里氏木霉细胞重组产生。

11.如权利要求6-10中任一项所述的方法，其中该β-葡糖苷酶被外源添加至发酵培养基中。

12.如权利要求6-10中任一项所述的方法，其中该β-葡糖苷酶由里氏木霉细胞重组产生。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与不具有以下这样的突变的相应里氏木霉细胞相比，该重组里氏木霉细胞具有提供降低的分解代谢物应答的突变。

14.如权利要求13所述的方法，其中该提供降低的分解代谢物应答的突变是creI基因中的突变。

15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该重组里氏木霉细胞进一步包含在xyr1基因座中的突变，该突变导致重组里氏木霉细胞变成葡萄糖盲。

16.如权利要求15所述的方法，其中该xyr1基因座中的突变是在xyr1中的位置824处丙氨酸被缬氨酸取代(A824V)。

17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该发酵产物是包含一种或多种多肽的蛋白质产物。

18.如权利要求17所述的方法，其中该一种或多种多肽对里氏木霉细胞是天然的。

19.如权利要求17所述的方法，其中该一种或多种多肽对里氏木霉细胞是异源的。

20.如权利要求17所述的方法，其中该一种或多种多肽是天然的，并且该一种或多种多肽对里氏木霉细胞是异源的。