[发明专利]使用患者来源的肿瘤球体筛选抗体的方法

权利要求书

1.一种筛选与抗原结合的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法包括以下步骤：

(i)用包含抗体或其抗原结合片段的噬菌体文库处理表达该抗原的患者来源的肿瘤球体，从而通过在4℃进行噬菌体展示，然后在37℃的升高温度下第一次筛选与该抗原结合且内化到细胞的抗体或其抗原结合片段；

(ii)用第一次筛选的内化到细胞的抗体或其抗原结合片段处理不表达该抗原的患者来源的肿瘤球体，以对结合不表达该抗原的患者来源的肿瘤球体的抗体或其抗原结合片段进行阴性选择；

(iii)向移植有表达该抗原的患者来源的肿瘤球体的动物模型给予抗体或其抗原结合片段用于体内淘选，以及将动物模型中的癌症组织解离成单细胞，该抗体或其抗原结合片段是在阴性选择下通过从如步骤(i)中筛选的内化到细胞的抗体或其抗原结合片段分离或去除与步骤(ii)的不表达该抗原的患者来源的肿瘤球体结合的抗体或其抗原结合片段而获得，从而第二次筛选与该抗原结合且内化到细胞的抗体或抗原结合片段；并且

(iv)从第二次筛选的抗体或其抗原结合片段中分离或去除与该抗原以外的抗原结合的抗体或其抗原结合片段。

2.权利要求1的方法，其中通过进行以下步骤获得表达该抗原的患者来源的肿瘤球体：

(a)解离分离的癌症患者来源的癌组织，并从解离的组织中收集细胞部分；并且

(b)用蛋白酶处理收集的细胞部分，然后过滤、离心和悬浮，由此获得单细胞。

3.权利要求1的方法，其中移植有表达该抗原的患者来源的肿瘤球体的该动物模型是免疫缺陷小鼠。

4.权利要求3的方法，其中该免疫缺陷小鼠是裸鼠、非肥胖糖尿病小鼠、重症联合免疫缺陷小鼠、非肥胖糖尿病-重症联合免疫缺陷小鼠或非肥胖糖尿病-重症联合免疫缺陷I12rg-/-小鼠。

5.权利要求1的方法，其还包括将通过该方法筛选的抗体或其抗原结合片段转化为IgG形式的步骤。