[发明专利]使用患者来源的肿瘤球体筛选抗体的方法

说明书

本公开文本涉及通过使用患者来源的肿瘤球体筛选抗体或其抗原结合片段的方法，并且更具体地涉及通过使用含有抗原的患者来源的肿瘤球体来筛选与该抗原特异性地结合的抗体或其抗原结合片段的方法。

技术领域

公开文本涉及通过使用患者来源的肿瘤球体筛选抗体或其抗原结合片段的方法，并且更具体地涉及通过使用含有抗原的患者来源的肿瘤球体来筛选与该抗原特异性地结合的抗体或其抗原结合片段的方法。

背景技术

抗体药物由于其高疗效和靶向治疗特性而在生物制药领域中增长最快。抗生素药物市场是200种生物制药中增长最快的领域，占生物制药市场总量的比例很高(37％)，抗体药物的全球市场预计在2012年以11.8％的年均增长率(为515亿美元)增长，在2017年达到899亿美元(2013Biopharmaceutics Trend Report,the Korean Ministry of Trade,Industry and Energy,2013)。

作为抗体药物主要靶标的疾病主要集中在特定的疾病，如难治性癌症(49％)和免疫疾病(35％)，因此在具有相似适应症的产品之间的市场竞争非常激烈。然而，在疾病中存在细分的治疗靶标，因此用于抗癌疗法的抗体治疗药物的开发领域肯定会在未来继续增长。

用于鉴定和获得作为这些抗体药物的主要活性成分的抗体候选物的技术可大体上分为：使用杂交瘤细胞系开发嵌合或人源化抗体、使用转基因小鼠的方法和使用抗体展示技术的方法。

1975年，开发了一种杂交瘤技术，该技术使用通过将癌细胞与正常细胞融合而形成的杂交细胞来产生单克隆抗体。从那时起，已经开始抗体药物的积极开发，并且已经开发了鉴定人源化抗体和人抗体的技术，以便解决当给人应用小鼠单克隆抗体时发生的HAMA(人抗小鼠抗体)反应。

可以通过转基因小鼠和抗体展示技术(噬菌体展示、酵母展示、核糖体展示等)来举例说明用于产生人抗体的技术领域。使用近来最常尝试的转基因小鼠进行抗体开发是这样的技术，该技术通过将现有的杂交瘤技术应用于移植有人抗体基因的转基因小鼠来产生人单克隆抗体。该技术具有很大的优势，因为它可以由于可能的体内成熟而产生高亲和力抗体，并且可以有效产生人抗体。然而，其缺点在于，转基因小鼠的使用条件昂贵，并且在技术门槛如生产工艺方面是困难的。

在抗体展示技术中，噬菌体展示技术是通过在噬菌体表面上展示抗体片段来筛选抗体的技术，并且基于M13PⅢ噬菌体的展示技术是最广泛使用的。然而，由于通过基因重组表达的抗体片段显示在噬菌体的表面上，这些噬菌体显示技术难以筛选细胞表面蛋白(如G蛋白受体)或难以重组表达的抗体。

为了解决这些问题，已经开发了在筛选步骤中不使用重组蛋白的策略，其为使用细胞表面蛋白自身进行筛选的策略。

在常规的引证参考文献中已经发现，可以通过将抗体候选物与细胞一起孵育来筛选与细胞表面上表达的抗原直接结合的抗体或肽(Andersen PS等人，Proc Natl Acad SciUSA 93:1820–1824,1996；Barry MA等人，Nat Med2:299–305,1995；Cai X,Garen A.ProcNatl Acad Sci USA 92:6537–6541,1995)。

然而，上述基于细胞的展示方法的缺点在于，由于使用在实验室中培养的细胞进行筛选，当通过该方法筛选的抗体实际应用于患者时不能适当地发挥其作用。

同时，通过接头将细胞毒性药物与抗体缀合，获得抗体-药物缀合物(ADC)。由于单克隆抗体显示出靶特异性，因此可以将抗体-药物缀合物的药物递送至表达抗原/靶标的肿瘤，该抗原/靶标被具有选择性靶向能力的单克隆抗体识别。理想的是，在给予后在血液中保持前药状态的抗体-药物缀合物不应该是有毒的，并且由于抗体在与其靶肿瘤抗原结合后被内化到癌细胞中，药物以活性形式释放并杀死肿瘤细胞。