[发明专利]含有Fc的蛋白的纯化方法有效
| 申请号： | 201780045463.1 | 申请日： | 2017-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN109563125B | 公开（公告）日： | 2022-08-09 |
| 发明（设计）人： | J.K.卡乌亚 | 申请（专利权）人： | 美国安进公司 |
| 主分类号： | C07K1/22 | 分类号： | C07K1/22;C07K1/34;C07K16/00 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 初明明;黄希贵 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 含有 fc 蛋白 纯化 方法 | ||
1.一种用于纯化包含Fc区的蛋白的方法，所述方法包括：
在蛋白与温度响应性蛋白A材料结合的温度使包含所述蛋白和一种或多种杂质的溶液与所述材料接触；和
用洗脱缓冲液在4ºC-25ºC的温度从所述材料中洗脱所述蛋白，所述洗脱缓冲液具有6.5至7.5的pH并且包含尿素或氯化胍，并且进一步包含山梨糖醇、脯氨酸和精氨酸，其中从所述溶液中的一种或多种杂质中纯化所述蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包含氯化胍。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包含尿素。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述尿素以2 M至4.5 M的浓度存在。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述尿素以4 M的浓度存在。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述山梨糖醇以2 M至2.5 M的浓度存在。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述精氨酸和/或所述脯氨酸以0.25 M至1 M的浓度存在。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述精氨酸和/或所述脯氨酸以0.5 M的浓度存在。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述洗脱缓冲液进一步包含盐。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述盐以0.25 M至0.8 M的浓度存在。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述盐是氯化钠。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包含2 M至4.5 M尿素、1 M至4.5 M山梨糖醇、0.25 M至1 M精氨酸、0.25 M至1 M脯氨酸、和0.25 M至0.8 M氯化钠。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包含4 M尿素、2.2 M山梨糖醇、0.5M精氨酸、0.5 M脯氨酸、和0.75 M氯化钠。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述洗脱缓冲液具有7.0至7.4的pH。
15.如权利要求1所述的方法，其中从所述材料中洗脱所述蛋白是在4ºC的温度进行的。
16.如权利要求1所述的方法，其中从所述材料中洗脱所述蛋白是在从20ºC至25ºC的温度进行的。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述温度响应性蛋白A材料被固定在固相上。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述固相是珠、树脂、凝胶、薄膜、或颗粒。
19.如权利要求1所述的方法，其中使所述溶液与所述材料接触是在4ºC的温度进行的。
20.如权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在从所述材料洗脱所述蛋白之前，用一种或多种洗涤溶液洗涤具有结合蛋白的所述材料。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述一种或多种洗涤溶液包含浓度为0.5 M至2 M的氯化钠。
22.如权利要求1所述的方法，其中所述包含Fc区的蛋白在哺乳动物细胞中重组产生。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
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