[发明专利]抑制易脱分化的细胞的脱分化的方法、所述细胞的调制方法、及物质的产生方法

说明书

本发明涉及抑制易脱分化的细胞的脱分化的方法，包括(1)将上述细胞应用于聚合物多孔质膜的工序、及(2)培养上述细胞，使增殖的工序，其中，上述聚合物多孔质膜是有具有多个孔的表面层A及表面层B和夹在上述表面层A及表面层B之间的大空隙层的三层结构的聚合物多孔质膜，其中存在于上述表面层A的孔的平均孔径比存在于上述表面层B的孔的平均孔径小，上述大空隙层有与上述表面层A及B结合的隔壁和被所述隔壁以及上述表面层A及B包围的多个大空隙，在上述表面层A及B中的孔与上述大空隙连通。

【技术领域】

本发明涉及抑制易脱分化的细胞的脱分化的方法、所述细胞的调制方法、及物质的产生方法。

【背景技术】

【细胞的脱分化】

再生医疗的重要度加速增加之中，使用有特异的功能的末梢细胞的移植疗法变得广泛实施，高的治疗效果集合了关注。软骨细胞是此移植疗法中关注的细胞的例。能从患者摘出且在生物体外培养健康的软骨细胞，向关节软骨的损伤部移植－包埋－取代的软骨再生术已经作为临床应用被推进。作为活用自身移植的优点的方法论的同时，在患部大的情况等中，在需要大量的细胞时，进行塑料培养皿等中的传代增殖变得不可或缺。

但是，软骨细胞当传代次数增加时已知称为“脱分化”的细胞特性的丧失现象，失去了产生蛋白聚糖等的细胞外基质的软骨细胞原本的功能，并且，已知变异为强烈显示增殖能力的成纤维细胞样细胞(专利文献1)。

报告了为了抑制含软骨细胞的易脱分化的细胞的脱分化，向培养容器表面包被人或动物来源的生物体物质(糖蛋白质、蛋白质等)的尝试(专利文献2)，或在高分子凝胶中培养的尝试(专利文献3)。

另外报告了，通过将易脱分化的乳腺上皮细胞在有多个微容器的细胞培养容器的微容器内使细胞重层化的状态下培养，抑制脱分化的方法(专利文献4)。

【聚酰亚胺多孔质膜】

聚酰亚胺多孔质膜在本申请前就用于滤器、低介电常数膜、燃料电池用电解质膜等，特别是以电池关系作为中心的用途。专利文献5～7特别记载了尽管气体等的物质透过性优良，空孔率高的，两表面的平滑性优良，相对强度高，高空孔率，有多个对于向膜厚度方向的压缩应力的耐力优良的大空隙的聚酰亚胺多孔质膜。这些均是经由酰胺酸而制成的聚酰亚胺多孔质膜。

报告了包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜而进行培养的细胞的培养方法(专利文献8)。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：WO2006/082854

专利文献2：特开平8-317786号公报

专利文献3：WO03/006635

专利文献4：WO2009/099153

专利文献5：WO2010/038873

专利文献6：特开2011-219585号公报

专利文献7：特开2011-219586号公报

专利文献8：WO2015/012415

【发明的概要】

【发明要解决的课题】

本发明旨在提供使用与以往完全不同的手段而抑制易脱分化的细胞的脱分化，能大量地供给所述细胞的方法。

【用于解决课题的手段】

本发明人鉴于上述课题，锐意探讨的结果，通过在有具有多个孔的2个表面层和夹在所述2个表面层之间的大空隙层的三层结构的聚合物多孔质膜上培养，令人惊讶地，发现可抑制易脱分化的细胞的自发的脱分化，从而完成本发明。