[发明专利]具有CD3结合域的基于多聚体IL-15的分子的构造和表征

说明书

本发明提出包含至少两种可溶性融合蛋白的可溶性融合蛋白复合体。例如，第一融合蛋白是共价链接至白介素‑15(IL‑15)多肽或其功能性片段的抗‑CD3抗体。第二融合蛋白包含识别疾病抗原的结合域，其中，这一域共价链接至可溶性白介素‑15受体α(IL‑15Rα)多肽或其功能性片段。该第一和第二融合蛋白中的一个或两个进一步包括免疫球蛋白Fc域或其功能性片段，且该第一融合蛋白的IL‑15域结合至该第二融合蛋白的的可溶性IL‑15Rα域以形成可溶性融合蛋白复合体。本发明进一步提供制作和使用本发明的复合体的方法。

相关申请

本申请是国际专利申请，且基于35 U.S.C.§119(e)，主张2016年9月20日递交的美国临时申请US 62/397,236和2016年5月27日递交的美国临时申请US 62/342,311的优先权，前述两篇临时申请均通过引用而整体并入本文。

技术领域

本发明通常涉及多聚体融合分子领域。

背景技术

在本文中揭示的发明之前，迫切需要研发新的策略，将多种效应分子靶向引导至疾病部位，以提供治疗性益处而没有与非特异性免疫活性相关的副作用。

发明内容

本发明至少部分地基于下述令人惊奇的发现，多特异性蛋白激活效应子T细胞和天然杀手(NK)细胞并引导其活性以对抗疾病细胞为目标，从而导致疾病特异性的细胞毒性。本文提供多特异性蛋白，其具有一个失败疾病抗原的结合域和识别T细胞上CD3的第二结合域。例示性的疾病抗原与瘤形成、传染病、或自体免疫疾病相关。具体而言，本文揭示一种蛋白复合体，其包含抗-CD3 scAb/huIL-15N72D融合蛋白和抗-CD20 scAb/huIL-15RαSu/huIgG1 Fc融合蛋白。这一复合体经由该抗-CD20 scAb域识别B细胞淋巴瘤，经由IL-15活性诱导NK和T细胞应答，经由该抗-CD3 scAb域激活T细胞应答，且经由该Fc结合域刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。

提供一种包含至少两种可溶性融合蛋白的分离的可溶性融合蛋白复合体。例如，该第一融合蛋白包含共价链接至白介素-15(IL-15)多肽的第一结合域。该第二融合蛋白包含识别疾病抗原的第二结合域，其中，此域共价链接至融合至免疫球蛋白Fc域的可溶性IL-15受体αsushi-结合域(IL-15RαSu)。该第一结合域或第二结合域中的一个包含抗-CD3抗体，且另一个结合域包含抗原特异性结合域。融合蛋白的例示性的抗原特异性结合域包括抗-CD20抗体。例如，第二融合蛋白包含共价链接至IL-15RαSu/Fc融合体的抗-CD20抗体。该第一融合蛋白的IL-15域结合至该第二融合蛋白的可溶性IL-15RαSu域，以形成可溶性融合蛋白复合体。或者，该第一融合蛋白包含共价链接至可溶性IL-15受体αsushi-结合域(IL-15RαSu)的抗-CD3抗体，其中，该IL-15RαSu融合至免疫球蛋白Fc域；而该第二融合蛋白包含识别共价链接至白介素-15(IL-15)多肽的疾病抗原的结合域。一些情形中，该IL-15多肽包含具有N72D突变的IL-15变体(IL-15N72D)。

一些情形中，该抗-CD3抗体包含单链抗体，其中，免疫球蛋白轻链可变域通过一多肽链接序列共价链接至免疫球蛋白重链可变域。同样，一些情形中，该识别疾病抗原的结合域，如抗-CD-20抗体，是单链抗体，该单链抗体包含通过一多肽链接序列共价链接至免疫球蛋白重链可变域的免疫球蛋白轻链可变域。

一种例示性第一融合蛋白包含SEQ ID NO:2中详述的氨基酸序列。一种例示性第二融合蛋白包含SEQ ID NO:4中详述的氨基酸序列。一种例示性的编码该第一融合蛋白的核酸序列包含SEQ ID NO:1中详述的序列。一种例示性的编码该第二融合蛋白的核酸序列包含SEQ ID NO:3中详述的序列。一方面，该核酸序列进一步包含启动子、转译起始信号、以及可操作地链接至编码该融合蛋白的序列的前导序列。