[发明专利]5’S-LNA核苷酸和寡核苷酸

说明书

本发明涉及式(I)的化合物其中R²和R⁴结合在一起形成基团如‑CH₂O‑。式(I)的化合物可以用于制备作为反义药物的5’S‑LNA寡核苷酸。

本发明涉及在糖环的5’-位上带有硫原子的LNA亚磷酰胺(phosphoramidite) 结构单元、用于制备这种结构单元的方法和用于制备包含这种结构单元的寡核 苷酸的方法。

本发明由此特别地涉及式(I)的化合物

其中

R¹是磷酸酯保护基；

R²和R⁴一起形成-CH₂O-、-CH₂NH-、-CH₂S-、-CH₂N(OR^p)-、-CHCH₃O-、 -C(CH₃)₂O-、-CH₂C(＝CH₂)-、-CHCH₃C(＝CH₂)-、-CHCH₃S-、-CH₂NR^p-、 -CH₂CH₂O-、-CH₂CH₂CH₂O-、-CH₂OCH₂-、-CH(CH₂OCH₃)O-、 -CH(CH₂CH₃)O-或-CH₂OCH₂O-；

R³是二烷基氨基；

R⁵是硫羟基保护基；

每个R^p是烷基；且

Nu是任选包含被保护的伯氨基基团的核碱基(nucleobase)。

使用寡脱氧核苷酸作为治疗剂，其中充分理解的Watson-Crick杂交原理被 用于靶向互补RNA链，自1970年代后期开始以来取得了显著进展(P.C. Zamecnik,M.L.Stephenson,P Natl Acad Sci USA 1978,75,280-284；S.T. Crooke,Antisense drugtechnology:principles,strategies,and applications,第2 版,Boca Raton,FL:CRCPress,2008)。

随后在合成寡核苷酸中引入了几种类型的化学修饰，以例如延长其半衰期、 改善药代动力学、增强RNaseH活性、降低毒性或增强错配区分。

最成功的修饰之一是引入硫代磷酸酯键(phosphorothioate)，其中一个非 桥连磷酸酯基氧原子被硫原子替代(F.Eckstein,Antisense and Nucleic Acid DrugDevelopment 2009,10,117-121)。这种硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸显示出增加的蛋 白质结合以及明显更高的核溶解降解稳定性，因此血浆、组织和细胞中的半衰 期显著高于未修饰的磷酸二酯类似物。这使得研发了第一代寡核苷酸治疗剂， 并且打开了例如锁定核酸(Locked Nucleic Acids，LNA)这样的后代修饰的大门。

然而，用硫代磷酸酯替代磷酸二酯键在磷原子上产生手性中心。因此，迄 今为止所有批准的寡核苷酸治疗剂都是大量非对映异构化合物的混合物，它们 具有潜在不同(和可能相反)的生理化学性质。