[发明专利]利用基本上不含凝固蛋白原的鲎阿米巴样细胞溶解物检测内毒素的方法在审
| 申请号： | 201780048853.4 | 申请日： | 2017-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN109790561A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | C·斯特姆博;D·S·赫伯斯特;K·E·尼科尔斯 | 申请（专利权）人： | 隆萨沃克斯维尔股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/00 | 分类号： | C12Q1/00;C12Q1/34;C12Q1/56 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 张静 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内毒素 凝固蛋白原 细胞溶解物 显色底物 检测样品 试剂接触 显色测定 试剂盒 显色 制备 测量 检测 | ||
1.一种使用显色测定法检测样品中的内毒素的方法，所述方法包括：
a.使样品与包含鲎阿米巴样细胞溶解物(LAL)和显色底物的试剂接触；
b.测量在样品中存在内毒素时由显色底物的变化引起的显色效应；
其中，所述LAL基本上不含凝固蛋白原。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述底物是共价键合至多于三个氨基酸的对硝基苯胺。
3.如权利要求1或2中任一项所述的方法，其中，所述显色底物是Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述显色底物的变化由于酶促反应而发生。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述酶促反应是从多肽切割发色团。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，通过测量380nm-420nm处的吸光度来完成测量显色效应。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，通过测量405nm处的吸光度来完成测量显色效应。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述试剂是液体。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述试剂是水性液体。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，将所述试剂冻干，然后在与所述样品接触之前在水性液体中重建。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，将LAL冻干，然后在与所述样品接触之前重建。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，将显色底物冻干，然后在与所述样品接触之前重建。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述样品是生物样品。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述样品选自：胃肠外剂型，疫苗，抗生素，治疗性蛋白质，治疗性核酸，治疗性抗体和生物学产品。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，通过SDS-PAGE和蛋白质染色测量，相对于LAL中的总蛋白质，基本上不含凝固蛋白原的LAL具有小于5重量％的凝固蛋白原。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中，通过SDS-PAGE和蛋白质染色测量，相对于LAL中的总蛋白质，基本上不含凝固蛋白原的LAL具有小于2重量％的凝固蛋白原。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，通过SDS-PAGE和蛋白质染色测量，相对于LAL中的总蛋白质，基本上不含凝固蛋白原的LAL具有小于0.5重量％的凝固蛋白原。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中，使用单个比色皿光谱法，多个比色皿光谱法或酶标仪进行显色测定。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：将所述显色效应与标准品进行比较以确定所述样品中的内毒素的量。
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