[发明专利]强阳离子交换层析载体及其使用方法

说明书

一种阳离子交换层析载体，其具备基材、和被固定于基材的单体单元中的一个至少具有磺酸基的共聚物，共聚物实质上不形成交联结构、并且共聚物不含有或者在实质上不造成影响的范围内含有丙烯酰胺和丙烯酰胺衍生物作为单体单元，共聚物的质量与基材的质量的比率为5％以上且200％以下，磺酸基的密度高于30毫摩尔/L且为200毫摩尔/L以下。

技术领域

本发明涉及具有强阳离子交换基团的离子交换层析载体、以及使用了其的生物分子的纯化方法。

背景技术

免疫球蛋白(抗体)为掌管免疫响应的生理活性物质。近年，在药物、诊断药或所对应的抗原蛋白质的分离纯化材料等用途中，其利用价值升高。抗体由进行了免疫的动物的血液或者拥有抗体产生能力的细胞的细胞培养液或动物的腹水培养液获得。但是，这些含有抗体的血液、培养液包含抗体以外的蛋白质、或源自细胞培养中使用的原料液的复杂的夹杂成分，为了由这些杂质成分分离纯化抗体，通常需要繁杂且长时间的操作。

液相层析对于抗体的分离纯化而言是重要的。作为用于分离抗体的层析手法，有凝胶过滤层析、亲和层析、离子交换层析和反相层析等，通过将这些手法组合，将抗体分离纯化。

离子交换层析为通过将吸附剂表面的离子交换基团作为固定相而可逆地吸附存在于流动相中的平衡离子来进行分离的方法。作为吸附剂的形状，可采用珠子、或平膜和中空纤维等膜等，在这些基材键合阳离子交换基团或阴离子交换基团而成的物质作为吸附剂市售。

对于具有阳离子交换基团的吸附剂，通常进行下述纯化：通过使低盐浓度的抗体溶液与吸附材料接触来吸附抗体，通过提高流动相的盐浓度来洗脱所吸附的抗体。进而，作为更良好的方法，也提出了以下说明的利用流通方式进行的目的物质的纯化。

流通方式指的是由目的物质使杂质选择性地吸附于吸附剂的纯化方法的方式。因此，与以往的利用了吸附、洗脱的方法相比，实现缓冲液的节约、工序的简化。另外认为，若可以以高流速对抗体溶液进行处理，则流通纯化的优点进一步发挥作用。

另外，在阳离子交换工序中，往往目的在于，将抗体单体与抗体二聚体等聚集体分离。但是，由于抗体单体与抗体聚集体的等电点大致相等，因此在流通纯化中，特别难以将抗体单体与抗体二聚体分离，需要阳离子交换体的细致设计。

专利文献1中公开了将具有强阳离子交换基团的单体和非带电单体接枝聚合于载体而成的适于流通纯化的层析载体。

专利文献2中公开了温度响应性单体和具有强阳离子交换基团的接枝链固定于载体而成的适于流通纯化的层析载体。

专利文献3中公开了具有弱阳离子交换基团的适于流通纯化的层析载体。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2013-189427号公报

专利文献2：国际公开第2014/171437号

专利文献3：国际公开第2016/013609号

发明内容

发明要解决的问题

专利文献1中公开的阳离子交换体的特征在于，固体载体上的低密度(1～30毫摩尔/L)的阳离子交换基团的使用，对于更大的阳离子交换基团的密度而言，在流通纯化中，不能有效地去除聚集体，因此阳离子交换基团的密度存在限制。因此可以纯化的抗体量未必多。