[发明专利]单细胞中细胞内或表面分子靶标的多重检测

权利要求书

1.一种方法，其中包括：

(a)将包含核酸靶标的细胞与至少两种缀合物接触，包含核酸诱饵链(i)的各缀合物通过(iii)可切割接头与(ii)核酸报告链连接，其中核酸诱饵链含有与目标核酸靶互补的核苷酸序列，以产生包含靶-缀合物复合物的修饰细胞；和

(b)将步骤(a)的修饰细胞加载到含有微孔的基板上，以产生负载的基板。

2.如权利要求1所述的方法，其中还包括：(c)将负载的基板与包含至少两组的至少两组固定化核酸捕获探针的覆盖基板接触，每个捕获探针包含与步骤(a)的核酸报告链的核苷酸序列互补的核苷酸序列，以产生至少两个封闭的微孔，所述至少两个封闭的微孔中的每一个包含覆盖基板的一组至少两个不同的捕获探针。

3.如权利要求1或2的方法，其中还包括(d)切割缀合物的可切割接头以释放核酸报告链。

4.如权利要求3所述的方法，其中还包括将所述封闭的微孔维持在核酸杂交条件下以产生固定在所述覆盖基板上的报告-捕获复合物。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述方法还包括将含有固定的报告-捕获复合物的覆盖基板从基板上解离，并使至少一种固定在覆盖基板上的报告-捕获复合物可视化。

6.如权利要求5所述的方法，其中还鉴定至少一种(a)的目标核酸靶标。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括使包含核酸靶标的细胞与至少三种缀合物接触。

8.如权利要求7所述的方法，其中步骤(a)包括使包含核酸靶标的细胞与至少5种缀合物接触。

9.如权利要求8所述的方法，其中步骤(a)包括使包含核酸靶标的细胞与至少10种缀合物接触。

10.如权利要求9所述的方法，其中步骤(a)包括使包含核酸靶标的细胞与至少50种缀合物接触。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述细胞是透化的。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述细胞是固定的。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述核酸诱饵链含有与核糖核酸(RNA)靶标互补的核苷酸序列。

14.如权利要求13所述的方法，其中RNA靶标选自mRNA靶标、tRNA靶标、rRNA靶标和miRNA靶标。

15.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述核酸诱饵链含有与脱氧核糖核酸(DNA)靶标互补的核苷酸序列。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述可切割接头选自光可切割接头和酶可切割接头。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述核酸报告链与可检测标记连接。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述可检测标记是荧光标记。

19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述基板是微芯片。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述基板含有2-20,000个微孔。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述基板含有5,000-20,000个微孔。