[发明专利]从含有肉毒杆菌毒素的溶液中分离肉毒杆菌毒素的方法有效

专利信息
申请号: 201780058610.9 申请日: 2017-11-29
公开(公告)号: CN110099918B 公开(公告)日: 2023-07-28
发明(设计)人: 丁贤壕;梁起赫;李彰训;金学祐;柳基赫;洪衡杓;宋晶贤;孔竣燦 申请(专利权)人: 玫帝托克斯股份有限公司
主分类号: C07K1/18 分类号: C07K1/18;C07K14/33;B01D15/36
代理公司: 北京市中伦律师事务所 11410 代理人: 杨黎峰;钟锦舜
地址: 韩国忠*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 含有 杆菌 毒素 溶液 分离 方法
【说明书】:

提供了从含肉毒杆菌毒素的溶液中分离A型肉毒杆菌毒素超大复合物的方法,该方法包括进行阴离子交换色谱和阳离子交换色谱。

技术领域

相关申请的交叉引用

本申请要求于2016年10月4日在韩国知识产权局提交的韩国专利申请No.10-2016-0127540的权益,其公开内容通过引用整体并入本文。

本公开涉及从含肉毒杆菌毒素的溶液中分离肉毒杆菌毒素的方法。

背景技术

从1890年至今,已经发现了分泌具有神经毒性的毒素的梭菌属菌株,并且在过去的70年中已经对这些菌株分泌的毒素的性质进行了研究(Schant,E.J.等,Microbiol.Rev.56;80;1992)。

梭菌属包括超过127种,根据它们的形态和功能进行划分。肉毒杆菌(Clostridiumbotulinum)是一种厌氧菌和革兰氏阳性菌,可产生强大的多肽神经毒素,在人类和动物中引起神经麻痹性疾病,即肉毒杆菌中毒。在土壤中发现了肉毒杆菌的孢子,甚至可以在未经适当处理的食物中培养大量这些孢子。这些孢子可能导致许多形式的肉毒杆菌中毒。

根据血清学特征,肉毒杆菌毒素分为A至G七种类型。每种毒素包括约150kDa的毒素蛋白,并且天然地由与其结合的各种无毒蛋白质的复合物组成。中复合物(intermediatecomplex)(300kDa)由毒素蛋白和无毒非血凝素(HA)蛋白、大复合物(large complex)(500kDa)和超大复合物(macro complex)(900kDa)组成,每个都具有中复合物与血凝素结合于其中的结构(Sugiyama,H.,Microbiol.Rev.,44,419;1980)。已知这种无毒的非血凝素蛋白质可保护毒素免受低pH和肠内各种蛋白质水解酶的影响(Sugiyama,H.,Microbiol.Rev.,44,419;1980)。

肉毒杆菌毒素在细胞中合成为单链多肽,分子量约为150kDa,然后在距离N-末端三分之一的位置处的通过细胞内蛋白酶的作用或通过用酶如胰蛋白酶的人工处理,裂解成轻链(分子量为50kDa)和重链(分子量为100kDa)的两个亚基。与单链多肽相比,这种切割的毒素具有高度增加的毒性。这两个亚基通过二硫键相互结合,每个亚基具有不同的功能。重链与靶细胞的受体结合(FEMS Microbiol.Lett.72,243;1990),并在低pH(pH 4.0)下与生物膜反应形成通道(Mantecucco,C.et al.,TIBS 18,324;1993),并且轻链具有药理活性,因此当细胞通过表面活性剂提供渗透性或通过电穿孔将轻链引入细胞时,干扰分泌神经递质(Poulain,B.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.85,4090;1988)。

A型肉毒杆菌毒素是一种天然生物制剂,已知对人类是最致命的。以摩尔计,A型肉毒毒素比白喉毒素致死高18亿倍,比氰化钠致死高6亿倍,比眼镜蛇毒素(cobratoxin)致死高3千万倍,比霍乱毒素致死高1200万倍(Singh,Critical Aspects of Bacterialprotein Toxins,page 63-84 of natural toxins II,edited by B.R.Sigh et al.,Plenum Press,New York(1976))。

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