[发明专利]普氏菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR1(Cpf1)的变体

权利要求书

1.一种分离的来自毛螺旋菌科细菌ND2006的、普氏菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR1(Cpf1)蛋白(LbCpf1)，其在以下一个或多个位置具有突变：SEQ ID NO:10的氨基酸1-1228的S202、N274、N278、K290、K367、K532、K609、K915、Q962、K963、K966，K1002和/或S1003。

2.根据权利要求1所述的分离的蛋白，其包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80％相同的序列。

3.根据权利要求1所述的分离的蛋白，其包含以下一个或多个突变：S202A、N274A、N278A、K290A、K367A、K532A、K609A、K915A、Q962A、K963A、K966A、K1002A和/或S1003A。

4.根据权利要求1所述的分离的蛋白，其还包含一个或多个减少核酸酶活性的突变，所述突变选自由D832和/或E925处、优选D832A和E925A处的突变组成的组。

5.一种分离的来自氨基酸球菌属物种BV3L6的、普氏菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR1(Cpf1)蛋白(AsCpf1)，其在以下一个或多个位置具有突变：SEQ ID NO:2的N178、S186、N278、N282、R301、T315、S376、N515、K523、K524、K603、K965、Q1013、Q1014和/或K1054。

6.根据权利要求5所述的分离的蛋白，其包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少80％相同的序列。

7.根据权利要求5所述的分离的蛋白，其包含以下一个或多个突变：SEQ ID NO:2的N178A、S186A、N278A、N282A、R301A、T315A、S376A、N515A、K523A、K524A、K603A、K965A、Q1013A、Q1014A和/或K1054A。

8.根据权利要求5所述的分离的蛋白，其还包含一个或多个减少核酸酶活性的突变，所述突变选自由D908和/或E993处、优选D908A和/或E993A处的突变组成的组。

9.一种融合蛋白，其包含经任选的间插接头与异源功能性结构域融合的根据权利要求1-8任一项所述的分离的蛋白，其中所述接头不干扰所述融合蛋白的活性。

10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述异源功能性结构域是转录激活结构域。

11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述转录激活结构域来自VP64或NF-κBp65。

12.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述异源功能性结构域是转录沉默子或转录阻遏结构域。

13.根据权利要求12所述的融合蛋白，其中所述转录阻遏结构域是克鲁贝尔相关盒(KRAB)结构域、ERF阻遏蛋白结构域(ERD)或mSin3A相互作用结构域(SID)。

14.根据权利要求12所述的融合蛋白，其中所述转录沉默子是异染色质蛋白1(HP1)。

15.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述异源功能性结构域是修饰DNA甲基化状态的酶。

16.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述修饰DNA甲基化状态的酶是DNA甲基转移酶(DNMT)或TET蛋白。

17.根据权利要求16所述的融合蛋白，其中所述TET蛋白是TET1。