[发明专利]通过检测糖蛋白2同种型α(GP2a)诊断急性胰腺炎(AP)的方法

说明书

本发明涉及通过检测糖蛋白2同种型α(GP2a)蛋白来诊断受试者的急性胰腺炎(AP)的体外方法。特别地，本发明提供了通过检测糖蛋白2同种型α(GP2a)蛋白诊断受试者的急性胰腺炎(AP)的体外方法，包括：提供表现出患有胰腺疾病的症状的人受试者的样品，其中在出现所述症状72小时内从受试者获得所述样品；提供针对GP2a的亲和试剂；使所述样品与所述亲和试剂接触，从而从所述样品中捕获GP2a；以及确定来自所述样品的GP2a浓度，其中，确定所述样品中GP2a的浓度大于对照样品中，例如一组健康个体中，GP2a的平均浓度，表明存在AP并且不存在慢性胰腺炎、胰腺癌、胃肠肠、肝癌、神经内分泌肿瘤、肉瘤、消化性溃疡或腹膜炎中的一种或多种。本发明进一步提供了开发用于实施所要求保护的方法和确定GP2a浓度并对一种或多种样品进行自动分析的试剂盒和系统。

技术领域

本发明涉及通过检测糖蛋白2同种型α(GP2a)蛋白来诊断受试者的急性胰腺炎(AP)的体外方法。特别地，本发明提供了通过检测糖蛋白2同种型α(GP2a)蛋白诊断受试者的急性胰腺炎(AP)的体外方法，包括提供表现出患有胰腺疾病的症状的人受试者的样品，其中在出现所述症状72小时内从受试者获得所述样品；提供针对GP2a的亲和试剂；使所述样品与所述亲和试剂接触，从而从所述样品中捕获GP2a；以及，确定来自所述样品中GP2a的浓度，其中，确定所述样品中GP2a的浓度大于对照样品中，例如一组健康个体中，GP2a的平均浓度，表明存在AP并且不存在慢性胰腺炎、胰腺癌、胃肠癌、肝癌、神经内分泌肿瘤、肉瘤、消化性溃疡或腹膜炎中的一种或多种。本发明进一步提供了开发用于实施所要求保护的方法和确定GP2a的浓度并对一种或多种样品进行自动分析的试剂盒和系统。

背景技术

在发达国家如美国[1]，急性胰腺炎(AP)(胰腺的急性炎性病症以及急性腹痛病例中住院的主要原因)的血清学诊断仍然是实验室的挑战[2]。因此，对于诊断AP的血清学参数的研究仍在不减弱地继续。

AP仍然是危及生命的疾病，重度AP的死亡率高达40％，AP的发病率为全球每10万人中有17.5至73.4例[2]。尽管尚未完全了解AP的病理生理学机制，但现在人们普遍认为，通过组织蛋白酶B或其他活性肽进行的消化酶原的过早胰腺内激活，特别是在胰腺囊泡中存储的称为酶原颗粒(ZG)的胰蛋白酶原的过早胰腺内激活起着关键作用[3-7]。因此，AP发病的特征是腺泡细胞损伤，导致酶原分泌的极性受损，随后ZG被挤出，其内容物通过基底外侧膜释放到间质中[4]。随后，由巨噬细胞和中性粒细胞介导的细胞炎性应答直至中性粒细胞胞外杀菌网络的形成可导致全身性炎性应答综合征甚至全身性休克[8]。因此，诸如胰脂肪酶和淀粉酶或胰蛋白酶原等ZG相关分子的泄漏以及由参与血流的免疫细胞诱导和释放炎性细胞因子如白细胞介素6和8(CXC8L)产生过多的潜在血清学AP特异性标记[9]。然而，尽管通过新兴的蛋白质组学技术不断识别出新的潜在生物标志物，但根据2012年修订的急性胰腺炎亚特兰大分类，血清脂肪酶分析仍然是用于诊断疾病的具有高强度证据的唯一血清学工具[10]。升高的水平应超过正常上限的3倍。由于其灵敏度增加，血清脂肪酶分析目前优于淀粉酶测试[11]。然而，通过最近对221例脂肪酶升高的患者进行的前瞻性分析，据报告，对主要患有失代偿性肝硬化和肾功能衰竭的51例(23.2％)非AP患者进行了假阳性脂肪酶检测[12]。

值得注意的是，血清C反应蛋白(CRP)用于AP的严重程度评估，其中高于150mg/dL(14286nmol/L)的水平指示AP的重度病程[13]。此外，降钙素原(PCT)被推荐作为早期预测重度AP、胰腺坏死和器官衰竭的有用标志物[10；14]。

其他血清AP标志物如胰腺异淀粉酶、胰弹性蛋白酶、胰蛋白酶、尿胰蛋白酶原激活肽、血清胰蛋白酶原2和3、磷脂酶A2和羧肽酶B的激活肽已被添加到不断增加的推定AP标志物列表中[2；9]。由于各种原因，例如较差的诊断准确性或费力的测试，这些新标志物尚未广泛应用于常规诊断中。