[发明专利]用于选择产生多肽的细胞的改进方法

权利要求书

1.核酸，其按5’至3’方向包含：

i)不含符合读框的翻译终止密码子的编码目的多肽的第一核酸片段；

ii)与所述第一核酸片段有效连接的第二核酸片段，其始于免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号；

iii)与所述第二核酸有效连接的第三核酸片段，其编码跨膜结构域；

其中第二核酸片段在其3’末端由其核苷酸序列如CTACCACCCCCTTC CTGTCCAG(SEQ IDNO:29)所示的核酸组成并且其核苷酸序列如CTACCACCCCCTTCCTGTCCAGAGCTG(SEQ ID NO:30)所示的核酸与第二核酸片段和第三核酸片段重叠，或第二核酸片段在其3’末端由其核苷酸序列如TGACCACGCCAATCGTGTCCAG(SEQ ID NO:14)所示的核酸组成并且其核苷酸序列如TGACCACGCCAATCGTGTCCAGAGCTG(SEQ ID NO:15)所示的核酸与第二核酸片段和第三核酸片段重叠。

2.权利要求1的核酸，其中始于免疫球蛋白重链CH3或CH4结构域的5’剪接供体位点，终止于后面的免疫球蛋白重链跨膜结构域外显子M1的3’剪接受体位点，且包含符合读框的翻译终止密码子和聚腺苷酸化信号的第二核酸片段进一步在聚腺苷酸化信号的5’包含编码选择标记的核酸。

3.权利要求2的核酸，其中目的多肽是免疫球蛋白重链。

4.权利要求1的核酸，其中核酸包含在表达盒内。

5.权利要求3的核酸，其中核酸包含在表达盒内。

6.权利要求1的核酸，其中第二核酸片段包含仅一个5’剪接供体位点和仅一个3’剪接受体位点。

7.权利要求3的核酸，其中第二核酸片段包含仅一个5’剪接供体位点和仅一个3’剪接受体位点。

8.权利要求4的核酸，其中第二核酸片段包含仅一个5’剪接供体位点和仅一个3’剪接受体位点。

9.权利要求1的核酸，其中第三核酸片段编码跨膜结构域，且该跨膜结构域由单个外显子编码。

10.权利要求4的核酸，其中第三核酸片段编码跨膜结构域，且该跨膜结构域由单个外显子编码。

11.权利要求6的核酸，其中第三核酸片段编码跨膜结构域，且该跨膜结构域由单个外显子编码。

12.权利要求9的核酸，其中跨膜结构域是由M1-M2-外显子融合编码的免疫球蛋白跨膜结构域。

13.权利要求10的核酸，其中跨膜结构域是由M1-M2-外显子融合编码的免疫球蛋白跨膜结构域。

14.权利要求11的核酸，其中跨膜结构域是由M1-M2-外显子融合编码的免疫球蛋白跨膜结构域。

15.权利要求1的核酸，其中第二核酸片段包含其核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示的核酸。

16.权利要求1的核酸，其中第三核酸片段包含其核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示的核酸。

17.权利要求1至16中任一项的核酸的用途，用于选择稳定转染CHO细胞。

18.用于选择表达免疫球蛋白的CHO细胞的方法，由此该方法包括：

a)用包含用于免疫球蛋白轻链的第一表达盒和含有权利要求1至16中任一项的核酸的用于免疫球蛋白重链的第二表达盒的一个或多个核酸转染CHO细胞；

b)在适于从所述核酸产生前体mRNA、加工所述前体mRNA和将所述经加工的mRNA翻译为免疫球蛋白重链的条件下培养所述转染的CHO细胞，其中所述转染细胞通过所述前体mRNA的选择性剪接产生可溶性免疫球蛋白和质膜结合免疫球蛋白；和

c)选择具有质膜结合免疫球蛋白的细胞作为所述表达免疫球蛋白的细胞。