[发明专利]与工艺杂质的结合降低的抗体

说明书

本发明涉及变体抗体和产生与工艺杂质的结合水平降低的所述抗体的方法。具体而言，本发明描述了在重链恒定区中的Kabat残基203和256之间的区域中的氨基酸的任一个或组合处已经被修饰的变体IgG4抗体，其中所述变体IgG4抗体相比于未修饰的IgG4抗体具有与宿主细胞蛋白(HCP)的降低的结合水平。本发明还涉及包含所述变体IgG4抗体的组合物。

发明领域

本发明涉及新型抗体，其具有的通过非特异性和/或特异性相互作用结合制造工艺杂质(诸如宿主细胞蛋白)的能力降低。更具体地，本发明涉及新型免疫球蛋白，其通过对抗体的氨基酸序列的修饰而具有降低的结合此类制造工艺杂质的能力。

发明背景

单克隆抗体(mAbs)是生物药物，其用于大范围疾病的治疗处理。这些复杂重组蛋白的制造通常需要使用生物宿主系统，其通过基因工程改造能够以合适活性的形式表达产物。在这方面，哺乳动物细胞系，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，泛在地用作许多mAb产品的工业生产的宿主，因为它们能够折叠、组装这些蛋白并对这些蛋白应用适当的翻译后修饰，确保它们与人类系统的相容性。

后果，和由此使用基于细胞的系统用于生产mAb的关键挑战，是需要从一定范围的其他复杂杂质分离产物蛋白。这些被称为工艺相关的杂质，且包括各种范围的蛋白，所述蛋白对宿主生物是内源的或与此类细胞相关(诸如病毒样蛋白)。这些所谓的宿主细胞蛋白(HCP)代表了广泛类别的分子，其有可能负面影响生物制药药物的稳定性和安全性。一些HCP可具有蛋白水解活性，其可不利地影响产物蛋白的稳定性。如果存在于最终药物产品中，则其他HCP有可能在患者中引起免疫原性响应。由于这些原因，HCP的清除代表了所有生物制药产品的制造的主要挑战。

宿主细胞蛋白的清除通常通过使用多种色谱纯化技术，利用正交分离化学法来实现。尽管这种方法通常是有效的，但当产物mAb表现出与构成HCP群体的一种或多种蛋白的一定相互作用或亲和力时出现挑战，导致这些HCP与产物的共纯化。在此类情况下，标准方法是开发合适的色谱柱洗涤策略，其从物理化学角度设计，以破坏这些相互作用。由于HCP相互作用的倾向在mAb分子之间变化，通常认为抗体的高变互补决定区(CDR)主要负责这些相互作用。然而，尚未阐明这些区域内导致相互作用增加的精确序列和结构基序。

在表示为G、A、M、D和E的五类免疫球蛋白(Ig)中，大多数mAb生物药物落在免疫球蛋白G (IgG)类内，其中存在编号为1至4的四个亚类。

最近，已经显示HCP诸如推定的磷脂酶B样2 (PLBL2)，也称为含磷脂酶B结构域的蛋白2 (PLBD2)，具有增加的与某些免疫球蛋白变体共纯化的倾向。这种与一些IgG同种型(但不是其他)共纯化的倾向的差异的确切原因尚不清楚，但先前的研究已经假定IgG和PLBL2之间的相互作用主要由CDRs驱动，但由IgG4恒定区的特征(将其与IgG1亚类区分开)促进(Tran等人 (2016) J. Chromatogr. 1438:31-38)。然而，这些差异的确切性质仍然未知。工艺杂质(诸如PLBL2)有可能在患者中引发免疫响应。此外，已经将脂酶诸如PLBL2鉴定为降解制剂赋形剂的潜在原因(Dixit等人, (2016) J. Pharm. Sci., 105(5):1657-66和US2016/0101181)。这些赋形剂对于最终制剂中产物蛋白的稳定化是必需的，并且它们的分解会损害保质期并因此损害药物的潜在安全性。由于这些原因，在最终药物产品中存在工艺杂质和HCP (诸如PLBL2)是非常不期望的。

某些免疫球蛋白与HCP (诸如PLBL2)相互作用的增加倾向，使得有必要开发专门的纯化方案以确保足够安全的最终药物产品。这种方法尽管有效，但是并不理想，因为它不仅增加了相关的制造成本，而且还增加对工艺验证的负担，并且需要显示纯化工艺可以将工艺杂质稳健地清除至可接受的水平。其次，这在增加的分析要求方面也具有影响，因为已经显示PLBL2难以通过常规技术检测，经常需要使用定制的免疫测定(WO2015/038884)。