[发明专利]胰岛素制剂的生物测定法

权利要求书

1.测量药物产品相对于原料药的效力的方法，其中药物产品相对于原料药的效力是通过使用原料药和药物产品两者的EC₅₀值由EC_50原料药/EC_{50药物产品}计算的，所述方法包括以下步骤：

(i)使过表达胰岛素受体的细胞与所述药物产品或所述原料药接触；以及

(ii)对磷酸化的Akt进行定量；

其中所述药物产品是口服制剂中的胰岛素肽，或者是液体制剂中的低亲和力胰岛素肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其包括(ii)用ELISA对磷酸化的Akt进行定量的步骤。

3.根据权利要求1所述的方法，其包括以下步骤：

(i)接种过表达胰岛素受体的细胞；

(ii)将所述药物产品或所述原料药加入/接触所述细胞；

(iii)裂解细胞；

(iv)将裂解物转移到预先用兔抗pAkt抗体包被的ELISA板中；

(v)通过小鼠抗pAkt抗体对所结合的pAkt进行定量；

(vi)通过HRP-抗小鼠IgG来检测小鼠抗Akt抗体；

(vii)添加HRP的底物；以及

(viii)测量显色，

其中pAkt是磷酸化的Akt。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其中所述细胞为中国仓鼠卵巢细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(i)后，将细胞孵育过夜。

6.根据权利要求5所述的方法，其中将细胞在37℃下孵育过夜。

7.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(ii)中，细胞与药物产品或原料药以2nM-20,000nM范围内的剂量接触。

8.根据权利要求1或3所述的方法，其中细胞与药物产品或原料药接触10分钟。

9.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(iii)中，使细胞裂解30分钟。

10.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(iv)中，兔抗pAkt抗体为磷酸-Akt(Ser473)(193H12)兔mAb。

11.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(v)中，小鼠抗pAkt抗体为Akt1同种型特异性(2H10)小鼠mAb。

12.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(vi)中为HRP-抗小鼠IgG。

13.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(vii)中，HRP的底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺。

14.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(viii)中，在450nm处测量显色。

15.根据权利要求1所述的方法，其中Akt选自同工型Akt1、Akt2和Akt3。

16.根据权利要求15所述的方法，其中Akt为Akt1。

17.根据权利要求15所述的方法，其中Akt为Akt2。

18.根据权利要求15所述的方法，其中Akt为Akt3。

19.根据权利要求1所述的方法，其中胰岛素肽为胰岛素类似物或胰岛素衍生物。

20.根据权利要求1所述的方法，其中胰岛素肽为口服制剂中的胰岛素类似物或胰岛素衍生物。