[发明专利]用于病毒特异性T细胞的活化和扩增的平台

说明书

本公开内容的实施方案涉及用于与非HPV病毒相关的疾病和恶性肿瘤或非病毒相关的疾病和恶性肿瘤的免疫疗法的方法和组合物，例如其中VST编码特异性针对非病毒性癌症的CAR和能够使用病毒、病毒疫苗或溶瘤病毒在体外或体内刺激VST。在具体的实施方案中，方法涉及靶向HIV、EBV、CMV、腺病毒、痘苗病毒和/或VZV的一种或多种抗原的免疫细胞的产生，包括具有使用IL‑7和IL‑15但非IL‑2、IL‑4或两者的刺激步骤的方法。其他具体实施方案在某些细胞(例如共刺激细胞和某些抗原呈递细胞)的存在下利用刺激。

本申请要求2016年9月16日提交的美国临时专利申请系列号62/395,438的优先权，其通过引用整体并入本文。

关于美国联邦政府赞助的研究或开发的声明

本发明是在美国国立卫生研究院/国家癌症研究所授予的3300028311和3300028312下由美国政府支持完成的。美国政府拥有本发明的某些权利。

技术领域

本公开内容至少涉及免疫学、细胞生物学、分子生物学和医学领域，包括癌症医学。

背景

抗原特异性T细胞活化和扩增需要3个信号。信号1需要T细胞受体(TCR)结合其同源肽-MHC复合物。信号2需要刺激T细胞表面上的共刺激受体，以及信号3来源于细胞因子。在体外，约每7至14天需要这些信号一次以维持抗原特异性T细胞的扩增。在这些信号中的任何一个均不存在的情况下，T细胞将不能增殖并且可能变得无反应或死亡。这些需要引入了若干挑战，特别是当活化来自癌症患者的肿瘤抗原特异性T细胞时，其肿瘤抗原特异性T细胞通常是无反应的(对活化无反应)或以其他方式功能失调。

已经解决的抗原特异性T细胞活化和扩增的主要挑战包括：

1.肿瘤诱导的T细胞无反应性。循环T细胞已被肿瘤无反应化并且难以从癌症患者的血液扩增；和

2.独有的抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的扩增需要用在HLA I类和II类分子上均表达肿瘤抗原的自体抗原呈递细胞和共刺激分子重复刺激抗原特异性T细胞。如果刺激过于强力，则非特异性旁邻细胞扩增，从而稀释抗原特异性T细胞。

自体树突细胞(DC)是强力的抗原呈递细胞，但它们的数量是有限的；它们不会分裂并且它们的单核细胞前体少于血液单核细胞(PBMC)的10％。将需要大量的血液来获得足够的DC以用于T细胞扩增(300mL至1升的血液)。

自体EBV转化的B淋巴母细胞样细胞系(LCL)也是优异的抗原呈递细胞，但是从患者建立LCL需要至少6周，并且LCL表达与更弱的EBV和非EBV抗原竞争的高免疫原性EBV抗原。

本公开内容解决了与抗原特异性T细胞活化和扩增相关的各种问题，并且缓解了本领域长期以来对用有效免疫疗法治疗病毒相关疾病和恶性肿瘤的需要。

概述

本公开内容涉及牵涉免疫原性识别特定靶标的免疫系统细胞的方法和组合物。在一些实施方案中，本发明涉及靶向在个体中引发免疫应答的生物学部分的病毒特异性T细胞(VST)(也可称为病毒抗原特异性T细胞或抗原特异性T细胞)的开发。在具体的实施方案中，本公开内容涉及靶向病毒抗原(包括病毒疾病相关抗原)的VST的开发。本公开内容的实施方案包括产生CD8+T细胞、CD4+T细胞和不进行杀伤但产生一种或多种细胞因子的细胞。在一些情况下，产生细胞毒性T细胞的混合物，并且在一些情况下，混合物靶向多于一种病毒抗原，包括多于一种病毒的多于一种抗原。在特定的实施方案中，病毒不是人乳头瘤病毒(HPV)。本公开内容的实施方案涉及非HPV特异性T细胞的产生和/或扩增。

本公开内容的实施方案涉及用于向感染非HPV病毒或患有与HPV无关的病毒相关疾病和恶性肿瘤(包括与某些病毒相关的癌症)的个体提供治疗的方法和组合物。在具体的实施方案中，本公开内容涉及用于能够靶向病毒相关的医学病症并且是其治疗方法的过继性细胞免疫疗法的方法和组合物。