[发明专利]核酸、蛋白和小分子在玻璃体囊泡体中的递送

说明书

本发明涉及房水和/或玻璃体液来源的细胞外囊泡的组合物及其用于将治疗剂递送至眼部组织以治疗眼科疾病的用途。进一步公开了制备所述组合物的方法。还公开了治疗和诊断眼部疾患的方法。

本申请要求2016年9月9日提交的美国临时专利申请序列号62/385,711的权益，该临时专利申请据此通过引用整体并入。

本发明根据国立卫生研究院的授权号UL1 TR000457-06在政府支持下完成。政府享有本发明的某些权利。

技术领域

本发明涉及用于将治疗剂递送至眼部组织以治疗眼科疾病的方法和组合物。

背景技术

涉及将核酸(诸如基因、mRNA、DNA、siRNA、miRNA或其他非编码RNA)、蛋白和/或小分子递送至眼内结构的疗法在包括眼部疾病的疾病中具有巨大的治疗潜力。然而，不能将生物活性分子直接递送至其靶点是眼部疾病治疗中的主要限制。血-视网膜屏障阻止大多数分子渗入视网膜。对于其他眼部组织而言也存在类似的限制。

例如，许多视网膜变性疾患是由单基因突变引起的。递送突变基因的正常拷贝或由该基因编码的蛋白具有防止此类疾病进展的潜力。这些基因的直接递送受到许多因素的限制，包括细胞外环境中游离遗传物质的不稳定性。蛋白的直接递送同样可受到细胞外组织中的不稳定性限制，以及渗透血-视网膜和其他天然屏障的限制。开发一种将核酸、蛋白或小分子带入细胞内的方法可以改变眼部治疗。

类似地，已经将许多视网膜疾病诸如湿性年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、源自多种原因的黄斑水肿等与血管内皮生长因子(VEGF)水平升高联系起来。玻璃体内注射抑制VEGF的抗体或小分子是针对这些疾病的有效疗法；然而，往往需要频繁注射。已经尝试了许多方法以通过替代性方法来减少VEGF，例如使用编码天然存在的抗VEGF蛋白诸如sFLT-1的基因的基因疗法。历史上，这些基因疗法使用病毒载体诸如腺病毒载体(或腺相关病毒(AAV)载体)进行基因递送。由于病毒载体本身的潜在毒性或免疫原性，针对视网膜疾病的基于AAV载体的基因递送受到限制。而且，最近的临床试验试图利用这种技术，但试验因失败而停止。

本发明旨在克服本领域的这种和其他缺陷。

发明内容

本发明的第一方面涉及一种包含一种或多种房水和/或玻璃体液细胞外囊泡体的组合物。所述组合物的房水和玻璃体囊泡体经修饰为含有一种或多种外源性物质。

本发明的另一方面涉及一种将治疗剂递送至受试者的选定细胞或组织的方法。该方法涉及提供一种包含一种或多种房水和/或玻璃体液囊泡体的组合物，其中所述组合物的囊泡体经修饰为含有一种或多种治疗剂。该方法还涉及在将包含经修饰为含有一种或多种治疗剂的所述一种或多种房水和/或玻璃体液细胞外囊泡体的组合物有效递送至所述受试者的选定细胞或组织的条件下，将所述组合物施用给所述受试者。

本发明的另一方面涉及一种制备包含一种或多种房水和/或玻璃体液囊泡体的组合物的方法，其中所述组合物的囊泡体经修饰为含有一种或多种外源性物质。该方法涉及提供包含玻璃体液和/或房水液的哺乳动物眼内液样品，并从所述眼内液样品中分离囊泡体。该方法还涉及将所述一种或多种外源性物质插入分离的囊泡体中。

本文描述了使用存在于眼睛玻璃体液和/或房水中的囊泡体来递送用于治疗目的的基因、蛋白或小分子的组合物和方法。可以从眼睛中安全地采集这些囊泡体，排空其天然内容物，然后填充治疗物质(核酸、蛋白或小分子)。然后可以通过多种途径，包括静脉内或通过眼内注射，将它们施用给患者。囊泡体被靶细胞吸收，并以适于发挥疗效的形式释放有效载荷。可以修饰囊泡体的细胞表面上的靶向分子，以允许将囊泡体直接靶向疾病部位，从而减少对附近组织的毒性。最重要的是，因为这些囊泡体是已经存在于玻璃体内的内源性生理体，所以可以进行其收获、装载和用于治疗目的的再施用，对眼睛的精细神经结构几乎没有毒性或免疫原性。

附图说明