[发明专利]睾丸生殖细胞肿瘤的初期阶段的早期检测

权利要求书

1.检测miR-371a-3p的试剂在制备用于检测对象中睾丸上皮内瘤变（TIN）的试剂中的用途，所述检测包括确定来自所述对象的生物样品中miR-371a-3p的表达水平，其中所述miR-371a-3p的表达水平指示所述对象中TIN的存在或不存在，其中所述检测包括以下步骤：

(i) 提供包含从所述生物样品分离/获得的cDNA的批次A，其中步骤(i)包括以下步骤：

(ia) 从所述生物样品分离RNA；以及

(ib) 将在步骤(ia)中分离的RNA转化成cDNA，从而提供包含所述cDNA的批次A；

(ii) 提供在步骤(i)中提供的批次A的三个或更多个等分试样，并用所述三个或更多个等分试样中的每一个进行独立的聚合酶链式反应（PCR）以扩增miR-371a-3p，从而提供包含经扩增的miR-371a-3p的三个或更多个批次B；以及

(iii) (a) 将等量的所述三个或更多个批次B混合，从而提供批次C，并通过基于PCR的方法确定批次C中miR-371a-3p的水平，或

(b) 通过基于PCR的方法确定所述三个或更多个批次B中的每一个中的miR-371a-3p的水平，并计算通过所述基于PCR的方法确定的三个或更多个miR-371a-3p的水平的平均值，

其中在步骤(iii)中确定的水平对应于所述生物样品中miR-371a-3p的表达水平，并且所述生物样品选自血清、血浆和全血。

2.根据权利要求1所述的用途，其中与对照相比miR-371a-3p的表达水平提高，则指示所述对象中TIN的存在。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中miR-371a-3p的表达水平高于预定义的截止值，则指示所述对象中TIN的存在，其中所述截止值为5。

4.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中在步骤(ii)中提供批次A的三个等分试样。

5.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中所述基于PCR的方法是定量实时PCR（qRT-PCR）或数字PCR（dPCR）。

6.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中miR-371a-3p是用于检测睾丸上皮内瘤变（TIN）的生物标志物。

7.根据权利要求6所述的用途，其中miR-371a-3p是基于血清的生物标志物。

8.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中所述试剂包含至少一种miR-371a-3p特异性引物和/或miR-371a-3p特异性探针。

9.根据权利要求1至2中任一项所述的用途，其中所述试剂包含在试剂盒中。