[发明专利]睾丸生殖细胞肿瘤的初期阶段的早期检测

说明书

本发明涉及检测对象中睾丸生殖细胞肿瘤(更特别地是睾丸上皮内瘤变(TIN))的初期阶段的方法，并且涉及miR‑371a‑3p作为用于检测TIN的生物标志物的用途。其还涉及miR‑371a‑3p特异性引物和/或miR‑371a‑3p特异性探针以及相应试剂盒用于检测TIN的用途。

技术领域

本发明涉及检测对象中睾丸生殖细胞肿瘤(更特别地是睾丸上皮内瘤变(testicular intraepithelial neoplasia，TIN))的初期阶段的方法，并且涉及miR-371a-3p作为用于检测TIN的生物标志物的用途。其还涉及miR-371a-3p特异性引物和/或miR-371a-3p特异性探针以及相应试剂盒用于检测TIN的用途。

背景技术

睾丸生殖细胞癌是20岁至45岁的青年男性中最常发生的癌症。通过早期检测、适当治疗和密切监测，从睾丸癌恢复的机会非常好，但是治疗和监测的长期作用是巨大的，并且根据肿瘤类型和阶段，重新发生睾丸癌或遭受复发的风险可高至31％。已知的发生睾丸癌的风险因素包括家族史和睾丸未降(undescended testicle)(隐睾)，这会使发生睾丸癌的风险提高四倍。

睾丸生殖细胞癌起源于前期病变“生殖细胞原位瘤(germ cell neoplasia insitu，GCNIS)”，也称为“原位癌(carcinoma in situ，CIS)”、“未分类小管内生殖细胞瘤(intratubular germ cell neoplasia，unclassified，IGCNU)”和“睾丸上皮内瘤变”(Berney D.M.等，2016，Histopathology 69(1)：7-10；Moch H.等，2016，Eur Urol 70(1)：93-105)。TIN是睾丸生殖细胞肿瘤的一致前体，并且它可能在睾丸生殖细胞癌变为侵入性之前的数年中存在于睾丸中(Dieckmann K.P.和Skakkebaek N.E，1999，Int J Cancer 83(6)：815-22)。具有前体的睾丸中有50％将在5年内进展成侵入性癌症，并且70％将在7年内进展成侵入性癌症。实际上，几乎所有具有TIN的睾丸最终都会发生癌症(Skakkebaek N.E.等，1987，Int J Androl 10(1)：19-28)。

因此，早期检测TIN和适当的后续治疗可以保护患者免受侵入性睾丸生殖细胞癌的发生。

到目前为止，外科手术是检测患者睾丸组织中TIN的唯一可能。由于在没有严重怀疑的情况下不会进行外科手术，因此TIN的检测是相当随机的。因此，需要用于检测TIN的非侵入性(例如，基于血清的)方法。

在生殖细胞肿瘤(germ cell tumor，GCT)组织中最初检测到miR-371-3聚类的miRNA(Palmer R.D.等，2010，Cancer Res 70(7)：2911-23)，并且独立研究确定血清水平升高(Dieckmann K.P.等，2012，Br J Cancer 107(10)：1754-60；Gillis A.J.等，2013，MolOncol 7(6)：1083-92)。然而，先前尝试建立miR-371-3簇的miRNA的(血清)表达水平与TIN之间的联系已经失败(Spiekermann M.等，2014，Andrology 3(1)：78-84；van Agthoven T.和Looijenga L.H.，2016，Oncotarget DOI：10.18632/oncotarget.10867)。

通过使用特定的检测方法(首次描述于PCT/EP2016/059604中)，本发明人现在首次表明，特异性miRNAmiR-371a-3p的体液表达水平可以作为TIN存在的生物标志物，将TIN患者与健康个体区分开来。

发明内容

在一方面，本发明涉及检测对象中睾丸上皮内瘤变(TIN)的方法，所述方法包括确定来自对象的生物样品中miR-371a-3p的表达水平，其中miR-371a-3p的表达水平指示对象中TIN的存在或不存在。