[发明专利]磁性病毒粒子及其制备方法与用途

说明书

铁化病毒粒子，例如可带有如KillerRed蛋白质的光敏剂的铁化腺相关病毒粒子，及其用于光触发的抗肿瘤病毒疗法。

相关申请案的交叉引用

本案主张于2016年11月4日提交的美国临时申请案62/417,946 的权益，其内容通过引用整体并入本文中。

背景技术

在癌症的创新性治疗中，病毒疗法是一种具潜能的癌症治疗剂，目前正在临床试验中评估几个不同病毒科的病毒(Bell et al.,Cell Host Microbe,2014；Russell etal.,Nat.Biotechnol.,2012；Miest et al.,Nat.Rev.Microbiol.,2014)。在大多数病毒疗法的临床试验中，病人通过肿瘤内注射来进行病毒疗法(Miest et al.,Nat.Rev.Microbiol.,2014)。于癌症治疗中，强化病毒的全身性传递仍为有效病毒疗法的一个障碍(Ledford,Nature,2015；Bell et al.,Cell Host Microbe,2014；Russell et al.,Nat.Biotechnol.,2012；Miest et al.,Nat.Rev.Microbiol.,2014；Kotterman et al.,Nat.Rev. Genet.,2014)。因此，实现有效且准确的全身性传递将大幅扩展病毒疗法的机会。

涉及腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的基因递送的临床试验已使许多单基因疾病的治疗(Kotterman et al.,Nat. Rev.Genet.,2014；Naldini,Nature,2015)及组织工程的发展(Yoo et al.,Adv.Healthc.Mater.,2016)能够成功。定向定位降低了治疗剂量，因此也降低了AAV导向的免疫反应、异位表达及导致基因突变的致癌基因活化的风险。而且，设计AAV壳体(Lisowski et al., Nature,2014)及从AAV基因体中消除CpG基序(Faust et al.,J.Clin. Invest.,2013)的改进方法已借由使其避免与因人类自然暴露于AAV 所产生的中和抗体结合，进而降低了AAV的免疫原性。有趣的是，AAV 壳体被设计以表达光依赖性因子基序，该光依赖性因子基序结合于经核定位序列标记的光可切换式蛋白质，当在暴露于光时，该AAV壳体显示显著增加的基因递送效率(Gomez et al.,ACSNano.,2016)。但是，准确并特定地递送合适剂量的遗传物质一直是主要的挑战。对于全身性的通过身体血液循环给药病毒，肝脏通常为预设的目的地 (Kotterman et al.,Nat.Rev.Genet.,2014)，且当其它器官/组织为预期靶标时则代表屏障。

发明内容

本公开至少部分地基于磁性病毒粒子的发展，举例而言，带有光敏剂蛋白质(如：KillerRed蛋白质)的铁化病毒粒子，其成功地定位于被施加磁场的部位。当用于光触发病毒疗法时，此种铁化AAV2粒子成功地降低肿瘤的生长。

据此，本公开的一方面特征为磁性病毒粒子(如：铁化病毒粒子)，包含与磁氧化纳米粒子(如：氧化铁纳米粒子)缀合的病毒粒子。该磁氧化粒子可具有从1至100nm的直径范围。于一些情况下，该磁氧化粒子可具有5nm的平均直径。于一些具体实施例中，该病毒粒子是腺相关病毒(AAV)粒子，举例而言，血清型1至9中的任一型(如：AAV2)粒子、慢病毒粒子或腺病毒粒子。于一些具体实施例中，本文所述的磁性病毒粒子中的任一者可带有例如KillerRed蛋白质的光敏剂蛋白质，其可包含SEQ ID No：1的氨基酸序列。

另一方面，本公开提供一种治疗肿瘤的方法，包含：(i)对有需要的受试者给药有效量的本文所述的磁性病毒粒子，其中，该磁性病毒粒子带有光敏剂，例如KillerRed蛋白质；(ii)对受试者的肿瘤部位施加磁场，以诱导磁性病毒粒子定位于肿瘤部位；以及(iii)于步骤(ii)之后，对受试者的肿瘤部位执行光照射。于一些具体实施例中，步骤(iii)以波长540至580nm(如：561nm)执行。或者或是此外，该肿瘤部位位于肺、肾、心脏、膀胱、皮肤、乳房或肠道。