[发明专利]用于产生仅重链抗体的经基因修饰的非人动物和方法

说明书

本申请提供了用于产生仅重链抗体(HcAb)的经基因修饰的非人动物和方法，其中所述经基因修饰的非人动物包含在内源免疫球蛋白重链(IgH)基因座处具有经工程改造的IgH等位基因的生殖系基因组，其中所述经工程改造的IgH等位基因缺少编码所有内源IgG亚类的CH1结构域的功能性基因片段。在一些实施方案中，提供了经基因修饰的小鼠，所述经基因修饰的小鼠包含经工程改造的IgH等位基因，所述经工程改造的IgH等位基因缺少编码Cγ3、Cγ1、Cγ2b及Cγ2c的CH1外显子的功能性内源基因片段。还提供了由所述经基因修饰的非人动物产生的HcAb或其衍生物。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2016年11月4日提交的美国临时申请62/417,581的优先权权益，该临时申请的内容全部以引用方式并入本文。

提交序列表的ASCII文本文件

将以下以ASCII文本文件提交的内容全文以引用方式并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：786192000140SEQLIST.txt，记录日期：2017年11月3日，大小：11KB)。

技术领域

本发明涉及用于产生仅重链抗体的经基因修饰的非人动物和方法。

背景技术

脊椎动物的常规抗体由配对的重(H)和轻(L)多肽链构成。缺少重链(HC)或轻链(LC)表达会导致B细胞发育停滞。有些物种诸如骆驼科(骆驼、单峰驼和美洲驼)、鲨鱼和银鲛产生不含L链的仅有HC的抗体(HcAb)作为其正常B细胞发育和组库的一部分。抗原结合位点(即，一种单一可变结构域(VHH))类似于常规抗体的VH。在骆驼科中，这些重链抗体(HcAb)属于IgG2和IgG3同种型，并且其可变结构域发生体细胞超突变。因此，骆驼科HcAb是亲和力成熟的并且可在抗原结合中发挥功能。

已生成含有重排单峰驼γ2a重链的转基因小鼠。单峰驼转基因被表达为仅重链抗体。参见Zou X.等人，Journal of Immunology,175:3769-3779(2005)。还已生成含有各种非重排嵌合HcAb基因座的小鼠。参见Janssens R.等人，PNAS,103(41):15130-15135(2006)。然而，转基因HcAb基因座中的有限数量的VH片段会使得一些抗原无法被这些小鼠识别，即便野生型小鼠有强效抗原应答。参见Janssens R.等人，PNAS,103(41):15130-15135(2006)；Drabe D.等人，Frontiers in Immunology,7(619):1-10(2016)；以及US8883150。轻链缺陷型小鼠中也会自发产生仅重链抗体，但在这些小鼠中，B细胞发育被阻滞在未成熟B细胞期。参见Zou X.等人，JEM,204(13):3271-3283(2007)。

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发明内容

本申请提供了用于产生仅重链抗体(HcAb)的经基因修饰的非人动物、方法和试剂盒。还提供了通过经基因修饰的非人动物和/或使用本文所述的方法产生的HcAb及其衍生物。

本申请的一个方面提供了经基因修饰的非人动物，该经基因修饰的非人动物包含在内源免疫球蛋白重链(IgH)基因座处具有经工程改造的IgH等位基因的生殖系基因组，其中经工程改造的IgH等位基因缺少编码所有内源IgG亚类的CH1结构域的功能性内源基因片段。在一些实施方案中，经工程改造的IgH等位基因包含紧接内源Cγ基因的CH1外显子之后的有缺陷的剪接位点。在一些实施方案中，经工程改造的IgH等位基因缺少内源Cγ基因的CH1外显子。在一些实施方案中，经工程改造的IgH等位基因缺少内源Cγ基因。